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SMOBIO蛋白marker FA Q
点击次数：2224 发布时间：2023/1/6 9:16:40
SMOBIO蛋白marker FA Q
Q，如何选择适合的产品？
SMOBIO 蛋白marker 分子量范围广、条带清晰锐利
PM2510符合大多数使用者需求
小分子选PM2700
大分子选PM2800
Q，为何大分子条带会消失不见
跑胶缓冲液遭受蛋白酶(proteinase) 污染，或是buffer reuse 太多次，导致长菌以致于有proteinase 存在，或是上样时反复使用同一支 tip。
受到污染后蛋白会从大分子开始降解
解决办法:
1. 上样时使用避免反复使用同一支Tip。
2. 内槽使用新鲜配置的跑胶缓冲液。
Q，为何转膜后条带会歪斜或消失不见？
胶体与膜之间未紧贴，胶体与膜之间仍有缓冲液
模拟试验: 转膜装置未紧贴
解决办法:
1. 增加filter paper 张数(或厚度)à上下各三张
2. 使用滚轮胶体与膜之间气泡或缓冲液赶走
3. 更换新的海绵垫
Q,为何转膜后高分子條帶消失？
1. >100KDa高分子量蛋白会需要比较长的转膜时间及较高的电压
2. 缓冲液重复使用太多次或组成不正确，建议使用新鲜配制的缓冲液
3. 转膜液体可添加0.01〜0.1％SDS以促进高分子量蛋白质的转移
在正确转膜条件下，10-310kDa在转膜后都是清晰可见的状态
Q,为何小分子条带 (<5kDa) 会跑不出来？
条带在不同缓冲溶液系统、不同浓度会有不一样的分布 (如下图)，
须根据需求来选择胶的浓度或挑选适合的缓冲溶液系统
✓ 若<10kDa分子分不开，建议使用MES buffer
✓ 若>100kDa分子分不开，建议使用MOPS buffer
Q,为何洗膜后条带会变弱或不见
1. 洗膜液体中的Tween20浓度过高 (建议使用0.05%~1%)
2. 洗膜转速过高(建议使用25~50 rpm)
经过测试：
T牌(箭头)模糊甚至10kDa消失不见。
SMOBIO洗完后，条带依然清晰锐利。
但过高浓度的Tween 20会造成整体条带颜色变浅
原创作者：北京鼎国昌盛
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