采用细胞系表达外源基因的技术被广泛用于多种重组蛋白的生产。然而，建立重组蛋白表达细胞系通常是一个长期的过程，并且蛋白质的表达水平往往不一致。在这里，加拿大的Chiu-An Lo等研究人员提出了一种有效建立稳定细胞系的方法，该细胞系的特点在于能够通过可控的和可量化的方式来表达任何重组蛋白。他们利用CRISPR/Cas9介导敲入技术将外源基因整合到特定的基因组位点上，如此一来，转基因的表达受内源性启动子的控制，从而确保重组蛋白的表达水平一致且可预知。通过在基因上选择具有期望表达水平的启动子来控制重组蛋白的表达水平。为了使重组蛋白的表达量化，Chiu-An Lo等人，将一个蛋白定量报告基因（PQR）插入到内源基因和外源基因之间。PQR允许等摩尔的生成内源性蛋白、重组蛋白以及荧光报告蛋白。因此，内源性蛋白和重组蛋白的表达水平可通过荧光信号被连续监测。

原文：

Chiu-An Lo, Alexander W. Greben, Brian Edwin Chen. Generating stable cell lines with quantifiable protein production using CRISPR/Cas9-mediated knock-in. BioTechniques 62:165-174 (April 2017).

原创作者：北京鼎国生物有限责任公司