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纯化效果检测：
取2-5μl得到的DNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
DNA在260nm处有吸收峰，检测时应该使OD₂₆₀值在0.1到1.0之间数值较准确。
OD₂₆₀为1时大概相当于50μg/ml双链DNA，40μg/ml单链DNA。
核酸浓度（μg/ml）=OD₂₆₀×50×稀释倍数。
OD₂₆₀/OD₂₈₀的值应该为1.7~2.0。
常见问题分析：

   Wash buffer A中加入18 ml 无水乙醇，充分混匀。
   Wash buffer B中加入64 ml无水乙醇，充分混匀。
   储存条件：  请按照上表中注意事项的条件保存，其他未说明的可常温或4度保存。
   步骤：
   1、样品处理
   全血：取50-300 μl全血，加入3倍体积的红细胞裂解液，震荡混匀，12000rpm离心1min，
   去上清。加入600 μl Lysis Buffer A，震荡混匀。
   禽血：加入10-100 μl禽血，直接加入600 μl Lysis Buffer A，颠倒混匀。
   动物组织：取20-50mg动物组织，液氮研磨或匀浆，加入100 μl PBS重悬样品，
   然后加入到准备好的600 μl Lysis Buffer A，振荡混匀。
   动物细胞：离心收集10⁵-10⁶个培养细胞，加入100 μl PBS重悬细胞，
   加入600 μl Lysis Buffer A，震荡混匀。
   2、 加入10 μl Proteinase K，60 ℃水浴20 min～40 min，其间颠倒混匀数次。
   如需消化RNA,可待样品裂解完全后加入10 μl RNase A，混匀，室温放置10 min。
   若加入样品较多，可适当延长水浴时间，适量增加Proteinase K的量，按比例增加
   Lysis Buffer A和Lysis Buffer B量。此步骤可以过夜处理。
   3、 加入400 μl Lysis Buffer B，漩涡震荡30 s。
   4、 12,000 rpm离心5 min，将上清转入离心柱中，静置2 min。
  上清可能出现少量白色漂浮物，此为未消化完全的细胞和蛋白质。
   5、 12,000 rpm离心1 min，弃废液。
   6、 加入700 μl Wash buffer A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心 1min，弃废液。
   7、 加入700 μl Wash buffer B（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm离心1min，弃废液。
   8、 加入500 μl Wash buffer B，12,000 rpm离心1 min，弃废液。
   9、 再次12,000 rpm离心2 min，将离心柱置于新的离心管中，并打开离心柱盖，于室温或37 ℃恒温箱放置5~10min，
  直至无明显乙醇味。
  10、 在硅基质膜中央加入50～200 μl Elution Buffer或双蒸水(事先预热55～65 ℃)，置于室温2 min，12,000 rpm离2 min。
   所得液体即为基因组DNA溶液。



 

更新时间：2024/9/23 10:42:56