AAA-DirectTM氨基酸分析系统 分析氨基酸*直接的方法
戴安公司AAA-Direct氨基酸分析仪掀起了氨基酸分析的一次重大革新，与现存的方法不同，氨基酸不需要任何柱前柱后衍生，通过积分脉冲安培检测器（IPAD）被直接检测，而且具有相当高的灵敏度，该系统采用了戴安公司为氨基酸的高分辨分离专门设计的的2mm直径的微孔阴离子交换柱Dionex　AminoPacTMPA10.
直接检测技术的简便性，使其能广泛运用于蛋白的鉴定和食品分析，另外，AAA-Direct系统具有独特的优点，可以用于在线的控制和过程的优化，如：大规模的细胞培养液和发酵液.
检测方法
通过IPAD直接检测一级和二级氨基酸.不需要柱前或柱后衍生.
采用适用于氨基酸分析的AAA-Certified金电极.
分离方法
氨基酸和氨基糖高分辨分离.
阴离子交换分离消除了基体影响.
一次进样氨基酸和碳水化合物同时出峰.
性能
高灵敏度-检出限可达pmol, 至少比茚三酮方法高出50倍.
对于大部分氨基酸, 检测器响应的线性超过三个数量级
的定量分析-所测数据与阳离子交换/茚三酮氨基酸分析方法所测的数据吻合.
可以直接了当地检测尚很难检测的氨基酸,如:色氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,蛋氨酸和磷酸氨基酸.
对于如胶原蛋白之类的复杂蛋白样品来说,是一种更快速、更便捷的方法.
样品前处理简单.
可以适用于任何常用的水解过程,如6M HCI, 4M甲基磺酸(MSA),过甲酸氧化/6M HCI,以及4.2M NaOH.
系统配置
四元梯度微孔泵和自动脱气系统提供精确的流路和组分控制,淋洗液消耗量低
整个系统的零部件及流路由惰性的,无金属的PEEK材料组成,可以耐腐蚀性的淋洗液和缓冲液
柱温箱内可以放置两根柱子,检测池和进样阀.
选配的样品准备装置使得某些操作自动化,如:准备多点校正标样时的单一或系列稀释,标准曲线自动产生.
经济而且操作方便
AAA-Direct氨基酸分析仪选用2mm微孔系统,淋洗液消耗量低,这样使操作更便利,更节约时间.IPAD的直接检测,免除了费时的样品衍生过程及昂贵的试剂消耗.在AAA-Direet系统中,不再需要麻烦的柱后衍生泵系统和很贵的试剂,样品只需稀释和过滤,图1所示为100pmol标样的典型谱图.
保留时间和检测响应值
对氨基酸标准溶液及诸如细胞培养液,发酵液和蛋白水解液等实际样品的分析已证明了,该系统具有的检测器响应和保留时间稳定性.图2所示是氨基酸标准混合液连续进样100次以上检测器响应值.图3和图4分别为细胞培养液介质进样100次以上保留时间和检测器响应的重现性.
稳定的分析柱技术
AminoPac PA10微孔柱是专门用于氨基酸分离的选择性阴离子交换柱.与以往的离子交换柱相比,这种柱子有很多优点:
梯度淋洗后快速再平衡.
的传质特征,分离效果好.
耐酸碱(PH范围:0-14)
机械稳定性(4000psi)和化学稳定性高,延长柱子寿命.
复杂基质进样后,可以用常规有机溶剂快速清洗
常用的梯度程序
图5所示为分离22种常见氨基酸的标准三元梯度.(水,0..25M氢氧化钠,1.0M醋酸钠).如果有特殊应用,梯度程序可以自由设定.
适用于所有标准水解过程
四种常用的水解过程,如6M HCI, 4M MSA,过甲酸氧化/6M HCI和4.2M NaOH,都适用于AAA-Direct氨基酸分析系统.另外,由于色谱保留机理是离子交换,AminoPac PA10对中性样品组分没有保留,这样就消除了基体的影响.
简化色氨酸测定
色氨酸在常用的HCI水解过程中会分解,影响测定结果.而NaOH水解过程在柱前、柱后衍生分析方法中又比较麻烦,因为水解产物必须经中和、稀释。.因此在阳离子交换/茚三酮方法中势必会消耗大量样品.另外,在衍生过程中产生的大量NaC1干扰,也是个问题.在AAA-Direct氨基酸分析系统中，因为用NaOH作为淋洗液，色氨酸经NaOH后可直接进样分析。样品的准备非常简单，不需中和反应。进样前只需进行水解产物的稀释和过滤
同时测定氨基酸，氨基糖和碳水化合物
蛋白水解物中通常存在氨基糖。AminoPac PA10对氨基糖亦有很好的响应，因此在测定氨基酸的同时可测定氨基糖（见图6）。
生化工业中，AAA-Direct氨基酸分析系统已经以实验和在线方式被用于发酵池和大规模细胞培养液中氨基酸和氨基糖的直接监控.这就为蛋白和肽治疗过程中氨基酸和碳水营养物的监控提供了更简便的方法.
图7所示为细胞培养液的分析结果.插图为分析中所用IPAD的波形,图中蓝线为积分阶段.采用此波形,能同时测定样品中常见的氨基糖和氨基酸.如果积分阶段移向更低的电压,羟氨基酸的影响被抑制.同一样品中的碳水化合物和羟基氨基酸能被选择性地检测.
图8所示是大肠杆菌发酵液随时间变化的一系列谱图的叠加.各种氨基酸随时间的变化一目了然.这对生产过程的化非常有利，因为基本氨基酸的量可以根据需要简便地控制和调整.
蛋白质和肽水解产物
运用AAA-Direct氨基酸分析系统,已经成功地分析了包括胶原蛋白在内的各种蛋白质和肽水解产物.检验数据与柱后茚三酮分析法的结果一致.图9所示为胶原蛋白水解物的色谱图.尤其值得一提的是,所有氨基酸的定量只需一次进样.
食品和饮料分析
该系统已经用于多种食品和饮料样品的分析.包括未加工和加工过的肉类水解物,果汁和蔬菜汁,啤酒和红酒.图10所示为多种不同的未加工肉类经过MSA水解后的分析谱图.图11所示为红酒中的游离氨基酸测定结果.样品前处理非常简单,因为IPAD的灵敏度非常高,允许样品稀释1000倍,甚至更高.
订货指南
氨基酸直接分析仪有四种不同的系统配置，适用于不同的氨基酸分析。系统1是基本配置；系统2包括了样品配置器，可自动配置（多种水平）校正标准；系统3和系统4则另外包括了样品冷却装置
标准配置
每台AAA-Direct系统包括：
带有真空脱气的微孔PEEK GP50泵 P/N 054045
ED40检测器（包括PH参比电极） P/N044094
微孔管道配件箱 P/N052324
淋洗液组织器：1个调节器
4个2L塑料瓶 P/N 054468
系统1
带有AS50自动进样器和加热室的AAA-Direct分析仪
除上述的标准配置外，还包括AS50全自动选择PEEK自动进样器和加热室；用于AS50的氨基酸金电极安培池；1.5ml瓶定孔转盘自动选择器和1包1.5ml带有隔垫的玻璃小瓶(100个/包)

系统2
带有AS50自动进样器、加热室和带有样品配置选择的AAA-Direct分析仪
除上述的标准配置外，还包括AS50全自动选择PEEK自动进样器、加热室和带有样品配置选择，用于AS50的氨基酸金电极安培池；1.5ml瓶定孔转盘自动选择器和1包1.5ml带有隔垫的玻璃小瓶(100个/包)

系统3
带有LC25和带有样品冷却选择器的AS3500的AAA-Direct分析仪
除上述的标准配置外，还包括带有样品冷却选择器的AS3500；LC25色谱柱箱；用于LC25的氨基酸金电极安培池；1.5ml瓶定孔转盘自动选择器和1包1.5ml带有隔垫的玻璃小瓶(100个/包)

系统4
带有LC30和带有样品冷却选择器的AS3500的AAA-Direct分析仪
除上述的标准配置外，还包括带有样品冷却选择器的AS3500；LC30色谱柱箱；用于LC30的氨基酸金电极安培池；1.5ml瓶定孔转盘自动选择器和1包1.5ml带有隔垫的玻璃小瓶(100个/包)

用AAA-Direct直接分析系统进行氨基酸确定，必须配备金电极电化学池，PeakNet工作站、AminoPac PA10分析柱及保护柱均需另外订货。

附加部件
AminoPac PA10分析柱 （2X250mm） P/N55406
AminoPac PA10保护柱 （2X50mm） P/N55407
用于AS50的氨基酸金电极安培池 P/N55826
用于LC25的氨基酸金电极安培池 P/N55827
用于LC30的氨基酸金电极安培池 P/N55828
氨基酸金工作电极 P/N55832
DX-LAN泵卡 P/N044195
检测卡 P/N044196
PeakNet控制WindowsNT工作站 P/N054464

技术指标
柱子
尺寸：
AminoPac PA10分析柱： 2X250mm
AminoPac PA10保护柱： 2X50mm
工作压力：4000Psi
流动相兼容性：pH 0-14；0-100% HPLC溶剂
树脂粒子参数
基球直径：8.5um
微孔尺寸：〈 10Å
交联度：（ %DVB ）：〈55%
胶乳参数
官能团：烷基季胺盐离子
胶乳交联度：1%
胶乳尺寸：80nm
疏水性：疏水
重量：60 微克当量（分离柱）
12 微克当量（保护柱）
柱结构：PEEK材料
所有部件由非金属组成
GP50 技术指标 AS50自动进样器技术指标
适用性：梯度和等度分离构造：化学惰性，无金属污染的peek材料；泵头和流路适用于pH值为0-14的淋洗液和反相淋洗液。类型：双重往复式柱塞微处理器控制连续冲程，可变流速控制方式：手动或通过继电器遥控TTL或PeakNet软件泵头体积：25µL死体积（无混合器）：〈300µL承受压力：35MPa(5000psi)压力报警限值：超出上限35 MPa(5000psi)一个单位；低于设定下限一个单位；流速度：设定值的±0.5%或0.2µL/min流速精密度：小于0.2%流速范围：0.01-2.50mL/min淋洗液选择：四种不同的流动相成分，任何一种所占比例为0-100%比例度：±2%压力波动：系统压力的2.0%（系统有压力状态下） 样品容量：49×10mL; 100×1.5mL样品瓶大小：10mL和1.5mL带裁切好瓶垫的样品瓶每个样品瓶可进样次数：1-99次*小进样体积：在100µL微型进样瓶中可从5µL样品中采集1µL，在300µL微型进样瓶中可采集10µL，在10mL微型进样瓶中可从500µL样品中采集20µL可变的体积范围：1-100µL有0.1µL的增加，100-1000µL有1µL的增加注射阀：带Tefzel转子封口的Peek Rheodyne 阀进样环体积：标准的25µL进样环及其它大小的进样环进样精度：固定式的样品环，进样量为20µL 时〈0.3%的偏差，变化式的样品环，〉0.5%的偏差稀释精密度：1:100稀释时为1.0%的偏差配置精密度：重量法，〈0.2%的偏差转移法，500µL的冲洗体积时误差〈0.01%环境温度范围：10-40℃湿度范围：10-90%相对湿度，无冷凝电压：90-265V, 47-63和Hz 功率：可在300-600瓦间选择尺寸大小：64×30×46cm(26×12×19inch)重量：〈30kg (〈65lb)加热箱和色谱箱技术指标大小：50×17.5×40cm(20×7×16inch)重量：色谱箱：9kg(20lb)加热箱：18kg(40lb)加热箱温度控制范围：10-40℃，偏差为±0.2℃环境操作温度：20-40℃温度稳定性：±0.2℃温度度：±0.1℃加热和冷却速率：环境温度为20℃时，在5min内可从20℃升至40℃在10min内可从40℃降至20℃死体积：*小值〈100µL安全性：漏液传感器和足够的漏液处理能力，液体溢出阀样品预备项技术指标稀释精度：1:100稀释时，面积偏差小于1.0%（包括稀释和进样）配置度：重量法为0.2%