赭曲霉毒素检测试剂盒
适用
Beacon赭曲霉检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测赭曲霉毒素

检测原理
Beacon赭曲霉检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用甲醇水震荡萃取粉碎样品中的赭曲霉毒素，过滤萃取物，然后进行免疫学检测。加入赭曲霉的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合赭曲霉毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养10分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的赭曲霉毒素浓度。

特异性
Beacon赭曲霉毒素检测试剂盒对于赭曲霉毒素有很强的特异性。标准品设为赭曲霉A， 与赭曲霉B的交叉反应率为9.3%。

试剂及材料
若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。

1．真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板。
2．5瓶2ml浓度为0，3.0，6.0，18，40ng/ml（ppb）的赭曲霉标准品，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，原始样品的浓度无需换算。）
3．1瓶10ml的酶标记物。
4．1瓶10ml的鼠抗赭曲霉抗体。
5．1瓶14ml的底物溶液
6．1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
7．1瓶50ml的20倍浓缩清洗浓缩液
8．操作说明书

注意事项
1．每种试剂*适用于Beacon 赭曲霉毒素试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2．试剂的稀释及污染以及程序中未提及的样品，均会导致结果失真。
3．不可使用过期试剂。
4．开始实验前试剂回温到室温（20-28℃）,避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5．赭曲霉为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6．停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有喷洒，立即清除并用大量水冲洗，

所需材料（不提供）
1．实验室用蒸馏水或去离子水
2．甲醇（色谱级）
3．量筒
4．用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
5．滤纸，Whatman GF/A及相当者
6．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸头
7．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸头
8．洗瓶
9．吸水纸
10．450nm的酶标仪
11．计时器

样品的准备
1．配制适量甲醇+水（7+3），混合并储存于密闭容器中。
2．粉碎好的样品过20目筛并混合，不立即分析的样品需冷冻储存。
3．称取20g样品，量取100ml 70%的甲醇水到一干净的有盖容器中。
4．剧烈震荡3分钟。
5．静置2-3分钟，使样品沉淀。
6．用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液，收集滤液到一干净容器中。

清洗液的准备
1．将清洗浓缩液倒入1L容积的容器中，加入实验室用蒸馏水。
2．将配好的清洗液转移至洗瓶中。

检测程序（注意标准及样品做重复，可以提高检测的度及精确度）
1．开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2．取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶标记物到微孔中。
4．加入50ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染
5．加入50ul抗体溶液到微孔中，轻微震荡微孔板。
6．室温下孵育10分钟。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后到掉，重复3次，共4次洗板。
8．一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室温下孵育10分钟。
11．每孔中加入100ul停止液。
12．450nm读吸光度值。

结果判断
1．半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的赭曲霉毒素含量大于此标准的赭曲霉毒素浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的赭曲霉毒素含量小于此标准的赭曲霉毒素浓度。
2．定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光度值的点用直线连接，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于标准的吸光度值或小于*小样品的吸光度值，即可说明此样品中赭曲霉毒素的含量小于3.0ppb或大于40ppb。
样品的计算

物质吸光度值平均吸光度值 ±SD%RSD%B0
0ppb1.5901.5861.588±0.0030.2100
3ppb1.3101.2701.290±0.0282.281.2
6ppb1.0060.9981.002±0.0060.663.1
18ppb0.5260.5430.534±0.0122.333.7
40ppb0.2770.2720.274±0.0041.417.3