T2毒素检测试剂盒
适用
Beacon T2毒素检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测玉米，玉米粉，玉米胚芽粉，玉米麸质粉以及玉米大豆混合物中的T2毒素。

检测原理
Beacon T2毒素检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用甲醇/水震荡萃取粉碎样品中的T2毒素,过滤萃取物并稀释，然后进行免疫学检测。加T2毒素的酶标记物到测试微孔中，接下来加入标准及样品，T2毒素抗体加入后反应开始，10分钟培养过程中，样品中的T2毒素及T2毒素酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合酶标记毒素。加入无色的底物溶液，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质，培养5分钟，加入反应停止液并且每个微孔中的颜色是可读的，未知浓度样品与标准物的颜色进行比较，就可以得到样品的T2毒素浓度。

灵敏性
Beacon T2 毒素试剂盒适用于谷物及谷物制品中T2毒素的定量分析，检测范围为0.025到0.5mg/kg（ppm）如果样品中的T2毒素含量小于0.025ppm，报告就应该写成＜0.025ppm.T2毒素含量大于0.5ppm,就应该写成＞0.5ppm。对于大于0.5ppm的样品可以用7%的甲醇水稀释并重新作定量分析。

特异性
Beacon T2毒素检测试剂盒所用抗体对于T2毒素及相关化合物具有很强的特异性。以T2毒素为标准相关的交叉反应率在以下表格中。
化合物%交叉反应率
HT-238%
T-2 Triol1.6%
T-2 Tetraol〈0.04%
Verrucarol〈0.04%

试剂及提供材料
原装试剂盒储存于2-8℃，在期前时试剂盒可以放心使用。
Ÿ真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板
Ÿ5瓶2ml浓度分别为0，0.025，0.075,0.2 和0.5 mg/kg（ppm）T2毒素标准溶液，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，所以原样品的浓度无需校正）。
Ÿ1瓶8ml的T2毒素酶标记物。
Ÿ1瓶8ml的兔抗T2毒素抗体。
Ÿ1瓶14ml的底物溶液
Ÿ1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
Ÿ操作说明书

注意事项
1．每种试剂*适用于Beacon T2毒素试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2．被稀释或污染的试剂及程序中未提及的样品种类都会导致结果失真。
3．不可使用过期试剂。
4．开始实验前试剂须回温到室温（20-28℃）,但避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5．T2毒素为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6．停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有溅出，立即清除并用大量水冲洗。

所需材料（不提供）
1．实验室用蒸馏水或去离子水
2．色谱级甲醇
3．量筒,100ml或更大容量。
4．用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
5．滤纸，Whatman GF/A及相当者
6．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸头
7．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸头
8．吸水纸或相当的吸水材料
9．450nm的酶标仪
10．计时器

萃取溶液准备
1．仔细量取30ml去离子水或蒸馏水，并转移至一个带有盖子的干净容器内。
2．仔细量取70ml甲醇至上述容器内。
3．盖紧盖子，充分混合，以备使用，并防止挥发。

样品的准备
1．粉碎好的样品过20目筛并在取样前充分混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。
2．称取20g样品，并量取100ml甲醇：水（7：3）溶液，至一有盖容器中。
3．盖好盖剧烈震荡3分钟。
4．静置2-3分钟，使样品沉淀。
5．用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液，收集滤液到一干净容器中。

检测程序（注意标准及样品做平行实验，可以提高检测的度及精确度）
1．开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2．取适量的孔条固定在微孔板架上，未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶标记物到微孔中。
4．加入50ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染
5．加入50ul抗体溶液到微孔中，轻微震荡微孔板。
6．室温下孵育10分钟。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注满蒸馏水，然后到掉，重复4次，共五次洗板。
8．一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室温下孵育5分钟。
11．每孔中加入100ul停止液。
12．450nm读吸光度值。

结果判断
1．半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的T2毒素含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的T2毒素含量小于此标准的浓度。
2．定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准点用直线连接，样品的吸光度值也位于这条直线上，在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于标准的吸光度值或小于*小样品的吸光度值，即可说明此样品中T2毒素的含量小于0.025ppm或大于0.5ppm。