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乳糖胆盐发酵培养基 大肠菌群检测 大肠菌群培养基
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(二) 试剂盒采用的测定方法:GB/T4789.3-2003乳糖胆盐发酵法
(三) 试剂盒的检验步骤:检验步骤与结果判断按GB/T4789.3- 2003中“7. 操作步骤”进行;
(四) 试剂盒结构:分前后两排透明方管,每个方管里面有一个特别设计的产气窗,前排三个大方管相当于双料乳糖胆盐培养基,后排六个小方管相当于单料乳糖胆盐培养基,但成份已进一步浓缩;当加入稀释的待检样液或原液后,每管内均达到国标所要求的培养基浓度,大肠菌群发酵培养基产酸产气,培养基变黄,产气窗内产生气泡,结果观察一目了然; 试剂盒采用无菌包装,供用户一次性使用;
(五)试剂盒的特点:
(1)对大肠菌群测定的方法仍然是GB/T4789.3-2003中乳糖胆盐发酵法;
(2) 省去了繁杂的试剂配制、分装、消毒以及收尾工作,提高了工作效率,符合现代检验向快速、准确方向发展的要求;
(3) 试剂盒占用空间小,减少玻璃器皿及培养箱的周转;
(六)保存方法:常温下避光保存(佳保存:0℃—8℃),有效期一年;
(七)应用范围:食品、瓶装或桶装饮用(纯净)水;
大肠菌群测试盒操作步骤
准备测试盒
●.排气泡:将测试盒前后分别以大约45度角倾斜,必要时可轻轻
用力在桌面上敲击数下,以排除产气窗内气泡;并将样品编号填写在盒盖编号位置;
●.开口:将测试盒平放在桌面上,左手揭开活动盒盖,右手持经火焰消毒的开口器,冷却后在测试盒每管中间位置连续穿刺开口;
检样稀释
以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样好用均质器,以8000~10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
用1mL来菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
乳糖发酵试验
将待检样品稀释液(或液体饮料食品原液)接种于大肠菌群测试盒发酵管内,前排三大管内接种1:10的均匀稀释液(或液体饮料食品原液)10mL,后排共六管,其中三管接种1:10的均匀稀释(或液体饮料食品原液)1mL,另外三管接种1:100的稀释液(或液体饮料食品1:10的均匀稀释液)1mL,将接种好的测试盒放入托盘内,置36±1℃温箱内,培养24±2h后,如果培育基变黄,产气窗内有气泡者,为产酸产气,如所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产酸产气者,则进行确正试验。
确证试验:两种方法任选其一
1)复发酵分离鉴定:
1.1)分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18~24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
1.2)证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1~2个进行革兰氏梁色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏梁色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性
2)荧光法鉴定:
用接种针粘取产酸产气的发酵液接种于荧光鉴定管内,每管接种3针,将接种后的荧光鉴定管置于36±1℃培养箱内培养18h—24h。
将培养后的荧光鉴定管置于暗处,用波长366nm的紫外光灯照射,如显蓝色荧光,为大肠菌群阳性管;如未显蓝色荧光,则为大肠菌群阴性管。
结果报告:
根据大肠菌群阳性管数,查MPN表,报告每100ml(g)食品中肠菌群MPN值
。
注意事项:
●在培育箱内拿出装有测试盒的托盘以及观察结果时,应平拿平放,以免由于测试盒的倾向而将阳性管产气窗内气泡排出,而影响结果.