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恒温振荡器葡萄糖的发酵液测试结果

点击次数：280 发布时间：2012/6/14

瑞士乳杆菌是恒温振荡器同型发酵、嗜热、耐酸乳酸菌，所产乳酸是乳酸和D乳酸的外消旋混合物。为使瑞士乳杆菌只积累乳酸，等开展了瑞士乳杆菌的代谢工程研究。分别编码乳酸发酵关键酶D乳酸脱氢酶和乳酸脱氢酶，作者采用同源重组的基因置换方法构建了两个稳定的工程菌。恒温振荡器个构建策略是使z舶D基因的启动子缺失，使基因不能转录，这样构建的工程菌为。

第二种策略是用同种，基因替换结构基因．使基因失活，而，基因剂量则加倍，基因的表达则利用基因的启动子，基因的表达产物L乳酸的胞内合成延长到细菌的稳定期，这一工程菌称为。

结果发现2个没有酶活力的工程菌只产一种构型的I，乳酸．数量等于野生型所产总乳酸量。酶活揭示，活力较野生型高出则更高出93％。李剑等筛选到一株产DL乳酸的乳杆菌阻，能在恒温振荡器48℃，葡萄糖的发酵液中快速生长并生产乳酸．2h产量可达140g／L以上。

    作者克隆出该菌的p乳酸脱氢酶基因，测定了序列，并对及其编码的蛋白质的一级结构进行了初步分析，以及对基因的功能作了鉴定。作者通过埭技术扩增出的可读框。在构建恒温振荡器表达重组质粒后用诱导，酶促反应液中乳酸浓度为．并测出乳酸全为口型，分析出乳酸的存在，判断工程菌表达的酶是。经核酸序列和氨基酸序列分析，明自乳杆菌获得的基因是一个新的．与其他乳杆菌属已知的基因不同。

    Dten等构建了能利用混合糖类．专门生产L—乳酸的重组大肠杆菌。其优点是构建的大肠杆菌可以生产旋光纯的乳酸：其次是大肠杆菌可以利用包括木糖在内的各种糖类。作者把带有牛链球菌乳酸脱氢酶基因低拷贝质粒分别转化到大肠杆菌大肠杆菌B菌株的中，构建了工程菌，用于生产I，乳酸。恒温振荡器菌株FER9和FBRll在不加选择性抗生素，含有葡萄糖或木糖的培养基中，在厌氧培养条件下连续转移10次，平均的FBR9和FBRu细胞中保持着带I，1]H基因的质粒。在含有10％葡萄糖的培养基、控制pH的条件下进行分批发酵试验，FBRn在30h内耗尽葡萄糖。

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