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乳酸细菌恒温摇床高密度培养的关键技术
(一)乳酸细菌高密度培养的要求
通常情况下,恒温摇床高活性的乳酸细菌都是采用液态发酵法生产的。乳酸细菌分为厌氧菌和兼性厌氧菌,这两种类型由于对氧的要求不同,因而高密度培养的方式也不同,基本上分为好气性培养和厌氧培养两种类型,相应地其工艺流程也不同。
(二)乳酸细菌高密度培养的关键技术
乳酸细菌从菌种收集、培养基优化到发酵罐扩大培养等过程需要注意一些关键技术,如菌种收集、补料流加策略、泡沫控制等。
1.菌种的收集
从乳酸细菌群体生长的一般规律看,菌体培养过程可大致分为延迟期、迅速生长期(对于裂殖菌又称对数生长期)、稳期、衰亡期四个阶段。恒温摇床延迟期又称生理调整期,这一阶段菌体内物质量显著增长,代谢机能活跃,菌体体积增大,对于杆菌表现为菌体明显伸长。菌群经过对新环境的适应阶段以后,细胞数快速增长,此时称为迅速生长期。
随着菌体的快速增殖,营养物质被迅速消耗,恒温摇床有生理毒性的代谢物质逐渐积累,到了迅速生长末期,细菌分裂速度降低,繁殖率和死亡率逐渐趋于平衡,活菌数基本保持稳定,此时称为稳定期。稳定期可以保持相当长的时间,此时微生物的生理特性稳定,细胞质内积累糖原、脂肪、多聚p羟基丁酸和多聚偏磷酸盐等,大多数细菌在稳定期的后期,菌体死亡率超过新生率,恒温摇床活菌数开始下降,细胞活性也明显减弱。处于稳定期的培养物不仅具有的菌体量,而且具有较好的生化稳定性,所以乳酸细菌培养物通常在此时收集。
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