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H7N9禽流感病毒检测试剂盒
点击次数：1506发布时间：2013/4/7 17:12:56
更新日期：2024/12/3 11:56:22
所 在 地：中国大陆
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相关标签：H7N9禽流感病毒检测试剂盒 H7N9禽流感试剂盒
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详细内容
H7N9禽流感病毒核酸荧光PCR测定试剂盒
Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit
H7N9禽流感病毒检测试剂盒联系电话：18925052681 QQ8581
【产品名称】
通用名称：禽流感病毒H7N9核酸测定试剂盒
英文名称：Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit
【包装规格】 25T/盒
【预期用途】通过对样本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特异性RNA核酸片段分别进行定性检测，可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别诊断。
【检验原理】本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）技术结合荧光探针技术，对禽流感H7N9特异性核酸片段进行荧光PCR检测。
【试剂盒主要组成成份】
| 序号 | 组分 | 数量 | 体积／人份 | ||
| 1 | H7N9核酸荧光PCR检测混合液 | 480?l×1 | 19?l | ||
| 2 | RT-PCR酶 | 28?l×1 | 1?l | ||
| 3 | DEPC-H2O | 400?l×1 | |||
| 4 | 阳性对照品 | 30?l×1 | |||
说明：不同批号的组分不可以互换使用。
自备试剂：Trizol；氯仿；75%乙醇；异丙醇或磁珠法RNA提取试剂；本公司可以代为订购或提供销售商联系方式。
【储存条件和有效期】 试剂盒应在－20℃及以下温度避光保存，有效期12个月。采用冰盒行运输；荧光PCR检测混合液反复冻融不宜超过3次。
【适用仪器】 本试剂盒适用于ABI7000，ABI7300，ABI7500，ABI7900，MJ-chromo4，MX3000P，MX3005P，SmartCyclerⅡ，Rotor-Gene6000，Lightcycler R480，iCycleriQ4，iCycleriQ5，Bio-Rad CFX96，SLAN等多色荧光PCR仪及相应软件。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100?l氯仿， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。
备注：如使用ABI系列PCR仪，请务必于passive reference 和 quencher处均选择“”。
5. 阈值设定
阈值设定原则以阈值线刚好超过DEPC-H2O的点。
6. 质量控制：试剂盒各对照品须达到以下要求，否则实验视为无效。
| Ct值 | |||
| FAM通道（检测H7） | HEX/VIC/JOE（检测N9） | ||
| DEPC-H2O | UNDET或45 | UNDET或45 | |
| 阳性对照品 | ≤35 | ≤35 | |
7. 试验结果的判断
| 通道 | Ct值 | 结果判断 | |
| 1 | FAM+HEX | UNDET或45 | 样本低于检测限，报告为阴性 |
| 2 | FAM+HEX | ≤43 | FAM通道为H7基因阳性； HEX/VIC/JOE通道为N9基因阳性 |
| 3 | FAM+HEX | 43～45 | 复检一次,如仍为43～45,则报告为阴性 |
进行定量检测时，仪器生成标准曲线后，自动显示待检样品定量值。
【参考值范围】阴性（检测对象H7N9为病原微生物，在健康人体中不存在）。
【对检验结果的解释】实验室环境污染，试剂污染，样品交叉污染会出现假阳性结果；试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。
【检验方法的局限性】当检测样本中被检核酸浓度含量低于检测限5×103copies/ml时可能会发生假阴性的结果。
【产品性能指标】检测限：1×103copie, , s/ml；
【注意事项】 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
1. 整个检测过程应严格分在三区进行：PCR反应体系的配制区；标本处理、加样区；PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。实验后即请清洁工作台，并进行消毒。
2. 使用不含荧光物质的一次性手套（经常替换） 、一次性专用离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。
3. 试剂准备和标本处理应使用超净工作台（负压式）或防污染罩，以防止对环境污染。
4. 每次实验应设置阴、阳性对照品。
5. 操作人员应经过专业培训，具有一定经验和操作技能。<
