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免疫组化细胞标本的制备

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细胞标本的制备方法有印片法如下。穿刺涂片法、沉淀法及活细胞标本的制备等，现分述：
（一）印片法
常用于手术切除标本。将新鲜标本沿病灶中心切开，将盖玻片压在病灶上，细胞即可附肝脾胰肾于载玻片。吹干或自然晾干后立即置于固定液内10～15min，取出后自然晾干，低温保存备用。
印片法操作简便，抗原保存好。缺点是有时细胞厚薄不均，并且载玻片上组织液较多，可能会影响标记结果。
（二）穿刺涂片法
常用于体表肿瘤以及肝、肾、肺、后腹膜肿瘤等穿刺。如穿刺液较少，可直接涂于载玻片，注意涂抹均匀；如穿刺液较多，细胞较丰富，可滴入装有1—2ml
Hanks液（或RP—M11640液）的试管内，以500r／min低速离心10～15min，弃上清，吸取1—2滴沉淀物滴在载玻片上，镜下观察细胞排列较密而不重叠为宜，自然晾干后固定。
穿刺法操作简便，细胞形态保持较好，但细胞分布不均匀。
（三）沉淀法
主要用于尿液、胸腹水、脑脊液等体液多而细胞少的标本，其制备方法有二种。
1．常规制备法
根据标本内细胞量的多少用不同的方法。如果细胞较多，液体浑浊，可吸取1—2滴直接涂在载玻片上，并注意涂均匀；如果细胞较少，可吸取瓶底自然沉淀液5ml，1500～2000r／min离心10min后，倒掉上清液，吸取1—2滴沉淀涂在载玻片上。如有细胞离心涂片器，可将标本用上述离心法制成2X105个细胞／ml的细胞悬液，吸取50gl加入涂片器内，离心后即制成分布均匀的细胞玻片。细胞分布在直径6mm的小圈内，每个圆圈内的细胞数约10s个。
2．单核细胞分离法
主要用于周围血或胸腹水中淋巴细胞的免疫细胞化学标记，以鉴别B淋巴细胞性白血
病、T淋巴细胞性白血病或恶性淋巴瘤。如为血性胸腹水，标本经1500r／min离心10min后弃上清，在沉淀中加15ml
RPMll640培养液，再用淋巴细胞分离液分离单核细胞。在5mlRPMll640培养液内于37℃培养30min后，离心沉淀，取上清，制成浓度为2X106个细胞／ml的细胞悬液，吸取50gl滴于载玻片上，略干，固定10min，取出晾干后备用。
3．注意事项
（1）在制备过程中，因反复离心洗涤后细胞黏附性较差，易脱片，因此载玻片应预先涂黏合剂。
（2）为节省试剂和便于观察，制片时细胞应集中在直径在o．6～1．0cm的圆圈内，细胞总数以105个为宜。
（3）富于黏液的标本，如痰液、食管拉网、胃液等，未经处理时不宜做免疫组化标记。
（四）活细胞标本的制备
活细胞标本一般用于单克隆抗体的筛选、细胞骨架蛋白的定位研究。标本来源主要是建株细胞、培养细胞、外周血等。细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上，也可将一定量的细胞收集离心进行涂片。不管任何形式，在进行免疫组化标记前均需反复洗涤，乙醇、丙酮或4％多聚甲醛固定。乙醇、丙酮固定5～15min，4％多聚甲醛固定3～5min。活细胞标本固定后应立即进行免疫组化定位。

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