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研究创新改进从酵母中提取gDNA的方法
研究创新改进从酵母中提取gDNA的方法
背景：
细胞壁是快速裂解酵母细胞的主要障碍。从酵母细胞中制备gDNA的传统方法包括使用破壁酶和玻璃珠，之后通过去垢剂裂解细胞，并利用酚-氯仿提取gDNA。在分析大量样品时，这些方法相当耗时，也相对较贵。
在快速分析时，也可以通过反复冻融裂解细胞。尽管这种方法相对较快，但是在氯仿抽提之后需要将样品转移至新的管中，这对于大量样品的同时抽提就不太方便。另外，还有一种更为简单的SDS处理方法。不过，似乎产量较低，结果重复性不太好。
方法改进：
由于酵母转化实验中常常使用醋酸锂（LiOAc）来弱化细胞壁，故我们决定将它与SDS结合，来开发一种从酵母中提取gDNA的快速、高效方法。
我们从YPD平板上挑了8个酿酒酵母的单克隆，重悬在100 µL 200 mM LiOAc和1% SDS的溶液中，并在70°C孵育15分钟。孵育之后，加入300 µL 96%乙醇，涡旋振荡混合样品，并以15000x g离心3分钟，收集DNA。将DNA沉淀溶解在100 µL TE中，通过短暂离心（15000x g，1分钟）去除细胞碎片，之后取1 µL上清进行PCR。
我们在不同的反应中扩增了两个不同的gDNA片段，大小分别为489 bp和2383 bp，并在0.9%的琼脂糖凝胶中分析了PCR产物。我们发现，通过LiOAc-SDS方法制备的所有样品都能高效扩增出两个片段。
我们开发出一种从酵母中提取gDNA的快速可靠方法，适用于3500 bp以下的DNA片段的扩增。整个过程可在15分钟内完成，不需要更换离心管，相当方便。液体和固体培养基的细胞都可使用。此方法适用于酵母重组子的快速筛选或酵母的常规基因分型。
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