聚蔗糖-泛影葡胺分层液(FICOLL)

产品简介：

本产品是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细 胞的密度差异 (红细胞和粒细胞密度为1.090 g/mL左右；淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~ 1.090 g/mL；血小板为 1.030~ 1.035 g/mL) ，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分 离出来。

产品指标：

密度

渗透压

无菌

1.077±0.001g/mL

290~350 mOsm/kg H2O

0. 1μm  滤膜过滤

保存条件：

本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温。

操作步骤：

1.    取新鲜抗凝全血 (EDTA 、枸橼酸钠或肝素抗凝均可) 或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液 或者PBS稀释全血。

2.     在离心管中加入适量分离液 (当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL ，加入等体积 分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果) ，将稀释后的血液平铺到分离 液液面上方，注意保持两液面界面清晰。  (可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液 上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之出现红细胞成

团下沉属正常现象。)

3.     室温，水平转子500~ 1000g ，离心20~30min (血液的体积越大所需的离心力越大，离心 时间越长，zui佳的分离条件需摸索，离心转 速大不超过1200g) 。

4.     离心后将出现明显的分层：上层是稀释的 血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分 离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管 底部是红细胞与粒细胞。

5.     小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心 管中，  10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层 细胞。250g ，离心10min。

6.     弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，

7.     重复步骤6

水平离心

分离

250g ，离心10min。

分离后

血浆层

淋巴细胞层 分离液层  红细胞层