本试剂盒仅供科研使用
胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒说明书
(货号:WS0121W 微板法 48 样)
一、产品简介:
胃蛋白酶(Pepsin)是一种消化性蛋白酶,由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白
质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等
症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解生成含酚的氨基酸,含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝
色;其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存条件
备注
提取液
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×2 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,每瓶
再加 13mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 3mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用加 2mL 提取液,再用蒸馏水稀
释 10 倍,即为 0.05mg/mL 酪氨酸。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、胃蛋白酶活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:
取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×3500rpm 离心 5min,取上清,
置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例
进行提取
② 液体样本:液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后,4℃×3500rpm,离心 5min,
取上清液检测。
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 680nm。
② 所有试剂解冻至室温。
③ 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
50
50
试剂一
50本试剂盒仅供科研使用
2
37℃孵育 5min
试剂二
250
250
37℃孵育 10min
试剂一
50
37℃孵育 5min 后,3000rpm 离心 5min,上清液待测。
④ 显色反应,在 EP 管中:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
标准管
(仅做一次)
空白管
(仅做一次)
上清液
30
30
标准品
30
提取液
30
试剂三
150
150
150
150
试剂四
30
30
30
30
37℃孵育 20min 后(若浑浊则室温 3000rpm 离心 5min),取 200μL 至 96
孔板中,于 680nm 处测定,读取吸光值 A。ΔA=A 测定-A 对照(每个样
本做一个自身对照)。
【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊,可以延长反应时间 T(如 37℃孵育 10min 延长至 20min)或增加样本
量 V1(如增至 100μL,则试剂二相应减少),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计
算公式重新计算。
2. 若 A 测定值大于 1.5,可以减少样本量 V1(如减至 20μL,用提取液相应补充),则改变后的
样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、按样本蛋白浓度计算:
酶活定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位(U)。
胃蛋白酶(U/mg prot)=[ΔA÷(A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T
=35×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷Cpr
2、按样本鲜重计算:
酶活定义:37℃每 g 组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位(U)。
胃蛋白酶(U/g 鲜重)=[ΔA÷(A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷(W×V1÷V) ÷T
=35×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷W
3、液体 LAP 活力的计算:
酶活定义:37℃每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μg酪氨酸为1个酶活单位(U)。
胃蛋白酶(U/mL)=[ΔA÷(A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷V1×2÷T
=70×ΔA÷(A 标准-A 空白)
V---加入提取液体积,1 mL;
V1---加入样本体积,0.05mL;
V2---第③歩反应总体积,0.35mL;
T---反应时间,10min;
C 标准---50μg/mL;
W---样本质量,g;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒
原创作者:上海瓦兰生物科技有限公司