产品描述

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，jia浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

表1.  DiD，DiO，DiI，DiR，DiS的化学性质

。

**DiR的发射波长肉眼不可见，所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。

使用方法

1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。

注意：未使用的储存液保存在-20 ^oC，避免反复冻融。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～

5 µM的工作液。

注意：工作液的终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找jia条件。  

2. 悬浮细胞染色

（1）悬浮细胞密度为 1 × 10⁶/mL加入到工作液中。

（2）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞jia培养时间不同。

（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。

（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 粘壁细胞的染色

（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

（4）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞jia培养时间不同。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式细胞仪的检测

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。

储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

DiR小动物活体成像荧光试剂

产品名称: DiR (DiIC18(7)1,1’-dioctadecyltetramethyl indotricarbocyanine Iodide)

分子式/分子量: C63H101IN2=1013.4

da吸收波长/发射波长: 748/780 nm

推荐滤光片设置: 710 ex/760 em

结构式:

Figure 1. T-cells isolated from the spleen were fluorescently stained with DiR and i.v. injected (5x106 cells/mouse) into a Nu/Nu mouse. Images above taken 24hrs post injection with IVIS Spectrum  show cells homing to the spleen.