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市场推送：果糖-6-磷酸（F6P）含量试剂盒说明书@2024实验室动态
点击次数：15 发布时间：2024/9/12 10:17:13
果糖-6-磷酸（F6P）含量试剂盒说明书
（WS8780F 分光法 48 样）
一、产品简介：
果糖-6-磷酸(F6P )是糖代谢和糖异生途径的中间产物 ，广泛地存在于动植物和微生物
体中。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：果糖-6-磷酸（F6P）在磷酸葡萄糖异
构酶和磷酸葡萄糖脱氢酶的相继作用下使 NADP+还原成 NADPH，通过检测 NADPH 在
340nm 处的增加量即可计算得出样品中的 F6P 含量。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 支
4℃保存
用甩几下或离心使试剂落入底部，再加
1.8mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉体 mg×1 支
-20℃保存
用甩几下或离心使试剂落入底部，再加
1.8mL 蒸馏水溶解备用。用不完的液体试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 μL×1 支
-20℃保存
用甩几下或离心使试剂落入底部，再加
1.1mL 蒸馏水溶解备用。用不完的液体试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
仅用来鉴定试剂盒中试剂是否正常（不参与
结果计算）。
使用方法：用标准管（F6P）甩几下使粉
剂落入底部，再加 0.5mL 蒸馏水混匀溶解
即浓度为 20μmol/mL, 再稀释 40 倍 成
0.5μmol/mL 的 F6P 后备用；按照加样表中
测定管操作（样本更换成备用浓度标准品）。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、
水浴锅、冰和蒸馏水。
四、果糖-6-磷酸（F6P）含量测定：
1、样本制备
① 组织样本：
建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm, 4℃离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。2
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 试剂解冻至室温（25℃），或可放在 25℃条件下水浴 5-15min。
③ 试剂一和二和三可按照 30:30:560 比例配成混合液（一枪加 620μL 该混合液）（该混合液
用多少配多少，现配现用）。
④ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中按照下表依次加入试剂：
试剂名称（μL）
测定管
空白管（仅做一次）
试剂一
30
35
试剂二
30
35
试剂三
560
630
样本
80
混匀，于室温（25℃）下孵育 20min 后于 340nm 处读取 A1（若
A 值继续增加，需延长孵育时间，直至 2 分钟内吸光值不变）。
试剂四
20
20
混匀，于室温（25℃）下孵育 20min 后于 340nm 处读取 A2（若
A 值继续增加，需延长孵育时间，直至 2 分钟内吸光值不变），
△A=（A2-A1）测定-（A2-A1）空白。
【注】若△A 的差值在零附近徘徊，可增加样本量 V1（如增至 300μL，则试剂三相应减少，保
持总体积不变），或增加样本取样质量 W，则改变后的 V1 和 W 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本重量计算：
F6P 含量(µg/g 鲜重)=[(ΔA÷(ε×d)×V2×106 ×Mr]÷(W×V1÷V)×D=365.8×ΔA÷W×D
2、按细胞数量计算：
F6P 含量(μg/104 cell)=[(ΔA÷(ε×d)×V2×106×Mr]÷(500×V1÷V)×D=0.74×ΔA×D
3、按照液体体积计算：
F6P 含量(µg/mL)=[(ΔA÷(ε×d)×V2×106 ×Mr]÷V1=365.8×ΔA
ε－－-NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm； d－－-光径，1cm；
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.08mL；
V2－－-反应总体积；0.7mL=7×10-4 L；
W－－-样本质量，g；
Mr－－-果糖-6-磷酸（F6P）分子量；260；
500－－-细胞数量，万；
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1。
原创作者：上海瓦兰生物科技有限公司
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