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市场推送：BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书@2024实验室动态
点击次数：12 发布时间：2024/9/13 10:10:18
BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书
（ 货号：
S 8 4 22F 分光光度法 50 管/48 样 ）
正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分
析。
测定原理
碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将 Cu2+还原成 Cu
+；2 分子的 BCA 与 Cu+结合，生成紫色络合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 处吸收峰
强。
自备仪器和用品
台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂 A：液体 60mL×1瓶，4℃保存。
试剂 B：液体 1.2mL×1支，4℃保存。
标准蛋白：液体 2 mL×1支，4℃保存。
工作液配制：临用请根据拟用工作液体积（样本数×1 mL），将试剂 A 和 B 按照 50：1
的比例混合，盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取
1. 液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g
组织，加入 1mL 提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）
冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 ，间隔 7 ，
总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。
空白管
标准管
测定管
蒸馏水（μL）
20
标准品（μL）
20
待测液（μL）
20
工作液（μL）
1000
1000
1000
混匀后置于 60℃保温 30min，于 1mL 比色皿在 562nm 处测定吸光值 A，分别记为 A 空白管、
A 标准管、A 测定。
注意：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式
Cpr (mg/mL) = C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）
= 0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）
Cpr (mg/g)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W = 0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W
W: 样本质量，g
注意事项
BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定取 1-2 个
样做预实验，若 A 测定管－A 空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定
的准确性。
原创作者：上海瓦兰生物科技有限公司
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