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植物细胞分裂素(CYT)酶联免疫分析(ELISA)
点击次数: 612发布时间:2011/3/7
资料简介: 植物细胞分裂素(CYT)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中细胞分裂素(CYT)含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物细胞分裂素(CYT)水平。用纯化的细胞分裂素(CYT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入细胞分裂素(CYT),再与HRP标记的细胞分裂素(CYT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞分裂素(CYT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物细胞分裂素(CYT)浓度。 试剂盒组成: 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2 标准品:54μg/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2 浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在、第二孔中分别加标准品100μl,然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为36μg/L,24μg/L ,12μg/L,6μg/L,3μg/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
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