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人利什曼病(LSM)ELISA检测试剂盒

点击次数: 208发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 上海卡努生物科技有限公司
  • 上传时间: 2018/11/5 9:24:13
  • 文件大小: 89KB
  • 文件类型: jpg
  • 所属分类: 操作维修手册
  • 下载次数: 273次
  • 查看次数: 208

资料简介:

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断

人利什曼病(LSMELISA检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人利什曼病(LSM)捕获抗体的包被微孔中,依次加入阴性对照、阳性对照、样本、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人利什曼病(LSM)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判断样品是否含有人利什曼病(LSM)。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1.     酶标仪(450nm

2.     高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3.     37恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

96

48

阴性对照

0.3mL

0.3mL

阳性对照

0.3mL

0.3mL

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

 

试剂的准备

 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。


洗板方法

1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步骤

1.     从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.     设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL

3.     待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL

4.     随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min

5.     弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.     每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min

7.     每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

1. 试验有效性:阳性对照孔OD值平均值≥1.00

               阴性对照孔OD值平均值≤0.15

2. 临界值(Cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3. 阴性判断:样品OD值<临界值(Cut off),样品为阴性

4. 阳性判断:样品OD值>临界值(Cut off),样品为阳性

试剂盒性能

1.     准确性:阳性对照孔OD值平均值≥1.00;阴性对照孔OD值平均值≤0.15,说明试验结果有效。

2.     特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.     重复性:板内、板间变异系数均小于15%

4.     贮藏:2-8,避光防潮保存。

5.     有效期:6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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