原花青素（Proantho Cyanidins, PC）试剂盒微板法_资料下载

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原花青素（Proantho Cyanidins, PC）试剂盒微板法

点击次数： 32发布时间：2011/3/7

上传者：上海瓦兰生物科技有限公司
上传时间： 2023/6/8 15:44:39
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所属分类：应用方法
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资料简介：原花青素（Proantho Cyanidins, PC）试剂盒说明书

(货号：WS0210W 微板法 48 样)

一、产品简介：

原花青素（Proantho Cyanidins，PC）广泛存在于植物的果实、种子、花和皮中的一种

黄酮类化合物，具有强的抗氧化性、清除自由基能力。简单的原花青素是儿茶素、或

表儿茶素、或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体本。试剂盒提供一种灵敏度更高的检测方法：

硫酸-香草醛法；即在硫酸提供的酸性条件下，植物原花青素 A 环上的间苯二酚和间苯三

酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在 500nm 处有特征吸收峰，测定 500nm 光

吸收值可计算原花青素的含量。

二、试剂盒组分与配制：

试剂名称

规格

保存要求

备注

提取液

60%乙醇×100mL（自备）

4℃保存

乙醇（mL）：水（mL）=60:40

试剂一

30%硫酸×15mL（自备）

4℃保存

甲醇(mL) ：硫酸(mL) =10.5:4.5

（先加甲醇，后缓缓加入硫酸）

试剂二

粉剂×1 瓶

4℃避光保存

用加 6mL 甲醇溶解

标准品

粉剂×1 支

4℃保存

若重新做标曲，则用到该试剂

三、所需的仪器和用品：

酶标仪、96 孔板、天平、离心机、蒸馏水、无水乙醇、硫酸和甲醇。

四、植物原花青素含量测定：

建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实

验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

称约 0.1g 样本（水分充足的样本可取 0.5g），加入 2mL 提取液，冰浴匀浆，用超声

提取法进行提取，超声功率 300W，提取 30min，12000rpm，25℃离心 10min，取上清，

用提取液定容至 2mL 待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取

2、上机检测

① 酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm。

② 在 96 孔板中按照下表依次加入试剂：

试剂名称（μL）

测定管

对照管

样本

试剂一

100

甲醇

100

试剂二

100

混匀，放在 30℃恒温培养箱孵育 20min 后，在 500nm 处

测定，ΔA=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。

【注】1. 96 孔板盖上盖子或者缠上保鲜膜或者锡纸（防止水份散失）。

2. A 值正常范围在 0.01-0.6 之间。否则加大样品取样质量 W 或增加 V1

（如增至 160μL，则试剂一相应减少，保持总体积不变）或用提取液

稀释样品，则改变后的 W、V1 和稀释倍数 D 代入公式计算。

本试剂盒仅供科研使用

五、结果计算：

1、标准曲线：y = 0.0738x - 0.0286，x 是标准品质量：μg，y 是ΔA。

2、原花青素含量(mg/g 鲜重)=[(ΔA+0.0286)÷0.0738]÷(V1÷V×W)×10-3×D

=1.36×(ΔA+0.0286)÷W×D

V－－-加入提取液体积，2mL；

V1－－-反应中样品体积，0.02mL；

W－－-样品质量，g；

D－－-稀释倍数，未稀释即为 1。

附：标准曲线制作过程：

制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 提取液（母液需在两天

内用且-20℃保存）。

把母液用提取液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可

根据实际样本来调整标准品浓度。

依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

原花青素, 试剂盒, PC

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