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淀粉磷酸化酶试剂盒
价格：￥810
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/3 14:00:51更新时间：2024/5/24 9:34:41
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
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细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
淀粉磷酸化酶活性测定说明书
（货号：WS0750F 分光法 24 样）
一、产品简介：
淀粉磷酸化酶是植物组织中降解淀粉的关键酶, 采用无机磷比色法测定淀粉
磷酸化酶活性。
二、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水。
三、试剂盒的组成和配制：
【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，避
免磷污染。
四、淀粉磷酸化酶活性检测：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 700nm，所有试剂解冻至室温（25℃）。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩下使粉体落入底部，再加
12mL 提取液后于 80℃水浴溶解
试剂二
粉体 mg×1 瓶
-20℃保存
临用甩下使粉体落入底部，再加
12mL 蒸馏水溶解
试剂三
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
A:粉体 mg×1 瓶
B:液体 3mL×1 瓶
4℃保存
临用加 2.9mL 的 B 液，再加 37.1mL
的蒸馏水，混匀溶解备用。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
试剂名称（μL）
测定管
对照管
试剂一
200
200
样本
150
试剂二
200
200
混匀，37℃孵育 20min
试剂三
200
200
样本
150
混匀，12000rpm，4℃离心 5min，上清液待测本试剂盒仅供科研使用
2
③ 显色反应：
上清液
150
150
试剂四
600
600
混匀，室温静置 3min，700nm 下读取各管吸光值，
△A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.8474x - 0.0164，x 是标准品摩尔质量（μmol/mL）, y 是△A。
2、按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/mg prot)= [(△A+0.0164)÷0.8474×V2] ÷（V1×Cpr）÷T
=17.7×(△A+0.0164)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/g 鲜重)= [(△A+0.0164)÷0.8474×V2]÷(W× V1÷V)÷T
=17.7×(△A+0.0164)÷W
V－－-加入提取液体积，1mL；
V1－－-加入样本体积，0.15mL ；
V2－－-酶促反应总体积，0.75mL；
T－－-反应时间，1/3 小时；
W－－-样本鲜重，g；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（5μmol/mL）：标准品用 10mL 试剂一溶解。（母液需在两天内用）。
2
把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样本来调整
标准品浓度。
3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
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