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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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α-葡萄糖苷酶(α - GC)试剂盒微板法

价格:¥1070

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:48T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/3 14:41:56更新时间:2024/12/5 9:09:02

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase, α-GC)试剂盒说明书
(货号:WS1250W 微板法 48 样)
一、产品简介:
α-葡萄糖苷酶(α-GCEC 3.2.1.20) 又叫α-D-葡萄糖苷水解酶,广泛分布于动植物和微生物中,是一
类能够从含有α-糖苷键底物的非还原端催化水解 a-1,4-糖苷键,释放出葡萄糖,或将游离出的葡萄糖残基
转移到另一糖类底物形成α-16 糖苷键,从而得到低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等物质。α-葡萄糖苷酶与
淀粉及糖原等糖代谢密切相关,对维持生物体的正常生理功能起着重要作用。
α-葡萄糖苷酶可以水解对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 405nm 有大吸收峰,
通过测定吸光值升高速率来计算α-葡萄糖苷酶活性。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,再加
2.5mL 蒸馏水溶解,4℃保存。
试剂二
液体 8mL×1
4℃保存
试剂三
液体32mL×1
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:取约 0.1g 组织(水分充足的样本取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴
匀浆。15000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
② 细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细
胞,加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s
间隔 10s,重复 30 次);15000 rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例
进行提取。
③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL
测定管
对照管
样本
10
10
试剂一
40
蒸馏水
40
试剂二
50
50
迅速混匀,37℃保温 30min本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
300
300
混匀, 取 200μL 96 孔板中,405nm 处测定吸光值 A
ΔA=A 测定-A 对照(每个测定管需设一个对照管)。
【注】若ΔA 较小,可以增加 37℃保温反应时间(如 1 小时),或者增加样本上样量 V1(如增至 30μL
则试剂二相应减少),则改变后的反应时间 T 或加样体积 V1 需重新代入计算公式计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 0.029x - 0.0143x PNP 摩尔质量(nmol), y 是△A
2、按样本蛋白浓度计算:
定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol -硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷(V1×Cpr)÷T=114.9×(ΔA+0.0143)÷Cpr
3、按样本鲜重计算:
定义:每克组织每分钟产生 1nmol -硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/g 鲜重)= [(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷(W×V1÷V)÷T=114.9×(ΔA+0.0143) ÷W
4、按细菌或细胞密度计算:
定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol -硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/104cell) = [(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷(500×V1÷V)÷T =0.23×(ΔA+0.0143)
5、按液体体积计算:
定义:每毫升样本每分钟产生 1nmol -硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/mL)= [(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷V1÷T=114.9×(ΔA+0.0143)
V----加入提取液体积,1mL
V1----加入反应体系中样本体积,10μL=0.01mL
W----样本质量,g
500----细胞或细菌总数,500 万;
T----反应时间,30min
PNP 对分子质量----139.11
Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 EP 管加入:10μL 标准品+40μL 蒸馏水+50μL 试剂二+300μL 试剂三,混匀,取
200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。

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