本试剂盒仅供科研使用
土壤木质素过氧化物酶(Soil lignin peroxidase,S-Lip)试剂盒说明书
(货号:WS1330W 微板法 48 样)
一、产品简介:
木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解
酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制
等方面具有较大的应用潜力。
土壤木质素过氧化物酶(S-LiP)氧化藜芦醇生成藜芦醛,藜芦醛在 310nm 处有特征吸
收峰。通过测定 310nm 处的藜芦醛的增加速率,即可得到 S-LiP 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体μL×1 瓶
4℃保存
临用用甩几下使液体落入底部,再
加 8.73mL 蒸馏水混匀备用。
试剂三
液体μL×1 支
4℃保存
临用用甩几下使液体落入底部,取
2 个新的 EP 管,每管取 3.3μL 液体,再
加 2mL 蒸馏水混匀备用。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板(UV 板)、天平、低温离心机、天平、空气浴/恒温震荡培养箱、甲苯。
四、土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
1 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 310nm。
2 所有试剂至常温(25℃)状态。
3 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
土样(g)
0.1
0.1
甲苯
30
30
25℃静置 15min
试剂一
200
蒸馏水
200
试剂二
60
60
试剂三
40
40
30℃震荡(空气浴)反应 3h,12000rpm,4℃离心 10min,取上清
200μL 移至 96 孔板中,于 310nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定- A
对照(每个样本做一个自身对照)。
【注】若△A 值较低,可加大土壤样本量或者延长反应时间,则改变后的样本质量 W 和反应时间 T
需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算:
酶活性定义:每克土壤每天氧化 1nmol 藜芦醇生成藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP 活性(nmol/d /g 土样)=(△A÷ε÷d)×109×V÷W÷T=567.7×△A÷W
ε---藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;
d---比色皿光径,0.5cm;
V---反应总体积,0.33mL=0.33×10-3L;
W---样本质量,g;
T---反应时间,3h=1/8d。