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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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脲酶(UE)试剂盒微板法

价格:¥830

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:48T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/6 14:09:23更新时间:2023/11/23 15:04:42

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
脲酶(UreaseUE)测定试剂盒说明书
(货号:WS2140W 微板法 48 样)
一、产品简介:
脲酶(UEEC 3.5.1.5)是一种含镍的寡聚酶,特异性地催化尿素水解释放出氨和二氧化碳。脲酶活性
与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关,反应了氮素状况。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N,其在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反
应,生成水溶性染料靛酚蓝,其深浅与溶液中的 NH3-N 含量呈正比,该物质在 578nm 有大光吸收,其
深浅与溶液中的 NH3-N 含量呈正比,进而得出脲酶活力大小。
二、测试盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 110 mL×1
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1
4℃保存
试剂二
粉剂 g×1
4℃保存
用甩几下或 4离心使试剂落入试管底部,再加
5mL 蒸馏水,充分溶解,用不完的试剂 4保存。
试剂三
液体 6mL×1
4℃保存
避光保存。
试剂四
液体 3mL×1
4℃保存
试剂五
A:液体 3.5mL×2
B:液体μL×1
4℃保存
临用取 30μL B 液进一瓶 A 液中,混匀后作为
试剂五使用。混匀后的试剂五一周内用完。
标准品
液体 1 mL×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、水浴锅或恒温培养箱、离心机、可调式移液器、研钵、冰。
四、脲酶(UE)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,冰浴
匀浆,12000rpm4℃离心 10min,取上清液待用。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔
10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 578nm
② 在 EP 管依次加入:
试剂名称(μL
测定管
对照管
样本上清液
20
20
试剂一
190
190
试剂二
90
蒸馏水
90
混匀,放入 40℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 1 小时。
③ 显色反应:在 96 孔板中依次加入:本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称(μL
测定管
对照管
②步反应混合液
15
15
蒸馏水
45
45
试剂三
60
60
试剂四
30
30
试剂五
60
60
混匀,37℃放置 20min 后,于 578nm 读取吸光值 A
ΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个自身对照)。
【注】1. 试剂三和四和五需分开加,不能事先混合。
2. ΔA 值较小,可增加取样质量 W(如 0.2g 或更多)或在步中增加样本加样体积 V1(如增至
50μL,则试剂一相应减少),或在步显色反应阶段增加上清液量 V2(如增至 30μL,则蒸馏水体
积相应减少);则改变后的 W V1 V2 需代入计算公式重新计算。
3. A 测定值大于 1.5,可在步阶段减少上清液量 V2(如减至 5μL,则蒸馏水体积相应增加);或
用蒸馏水稀释步检测用到的上清液,则改变后的 V2 和稀释倍数 D 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线:y=2.4197x - 0.0051x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA
2、按样本蛋白浓度计算:
酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE)活力(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.0051)÷2.4197]×(V3÷V2)÷(V1×Cpr)÷T×D
=6.9×(ΔA+0.0051)÷Cpr×D
3、按样本鲜重计算:
酶活定义:每克组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE)活力(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0051)÷2.4197]×(V3÷V2)÷(W×V1÷V)÷T×D
=6.9×(ΔA+0.0051)÷W×D
4、按细胞数量计算:
酶活定义:每 104个细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE) (μg/min/104 cell)=[(ΔA+0.0051)÷2.4197]×(V3÷V2)÷(500×V1÷V)÷T×D
=0.014×(ΔA+0.0051)×D
5、按液体体积计算:
酶活定义:每毫升液体每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE)活力(μg/min/mL)=[(ΔA+0.0051)÷2.4197]×(V3÷V2)÷V1÷T×D=6.9×(ΔA+0.0051)×D
V---提取液体积,1mL
V1---②步反应体系中样本加样体积,0.02mL
V2---③步显色阶段上清液体积,0.015mLV3---②步反应总体积,0.3mL
T---反应时间,60minW---样本质量,g500---细胞数量; D---稀释倍数,未稀释即为 1
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1. 把标准品母液(1mg/mL),用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0,4,8,12,16,20. μg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
2. 在③步显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

热门标签:脲酶(UE)试剂盒微板法 

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