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谷氨酸脱羧酶(GAD)试剂盒
价格：￥540
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/7 15:56:32更新时间：2024/11/21 9:51:32
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：152
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
谷氨酸脱羧酶（GAD）测定试剂盒说明书
（货号：WS2011F 分光法 24 样）
一、产品简介：
谷氨酸脱羧酶 (GAD，EC 4.1.1.15)是一种吡哆醛类裂解酶，能一的催化 L-谷氨酸
裂解成为 γ-氨基丁酸 (GABA)和 CO2。GAD 广泛分布于动植物和微生物中：哺乳动物
体内 GAD 催化产生的 GABA 是一种重要的抑制性神经递质；在植物中 GAD 的活性高
低可指示种子发芽能力和出苗率等。
本试剂盒利用苯酚和次氯酸钠比色法测定谷氨酸脱羧酶（GAD）催化产生的 GABA，
终生成蓝色物质，该物质在 645nm 处有明显光吸收，其颜色深浅与 GABA 含量呈正
比，进而得出 GAD 活力大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存 临用甩几下，使粉体落到底部，
再加入 6mL 试剂二溶解备用。
试剂二
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 1.5mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂六
A：液体 4.4mL×2 瓶
B：液体 5mL×1 瓶
4℃保存 临用
取 2.2mL 的 B 液进一瓶 A 液
中，混匀后作为试剂六使用。混匀
后的试剂半个月内用完。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存 若重新做标曲，则用到该标曲。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、离心机、可调式移液器。
四、谷氨酸脱羧酶（GAD）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、 样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
取上清液待用。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，
重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、 上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 645nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
200
试剂二
200
混匀，40℃孵育 30min。本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
200
200
混匀，室温 12000rpm，离心 3min，上清液待测。
③ 显色反应：在 EP 管中依次加入：
上清液
200
200
试剂三
125
125
试剂四
25
25
试剂五
200
200
试剂六
200
200
混匀，20℃放置 20min，取全部澄清上清液至 1mL 玻
璃比色皿（光径 1cm）中，于 645nm 处读取各管的 A
值，△A=A 对照-A 测定(每个样本需做一个自身对照)。
【注】若ΔA 值在零附近，可增加样本质量 W（如增至 0.2g），或延长 40℃孵育时间 T（如增
至 1h 或更长），或加大样本量 V1（如增至 300μL，则试剂三相应减少），则改变后的
W 和 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 2.0976x - 0.0059，x 为标准品摩尔质量(μmol)，y 为吸光值ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol 的 GABA 定义为一个酶活力单位。
GAD(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0059)÷2.0976]×(V2÷V3)÷(V1×Cpr)÷T×103
=397.3×(ΔA+0.0059)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟产生 1nmol 的 GABA 定义为一个酶活力单位。
GAD(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0059)÷2.0976]×(V2÷V3)÷(W×V1÷V)÷T×103
=397.3×(ΔA+0.0059)÷W
4、按细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞每分钟产生 1nmol 的 GABA 定义为一个酶活力单位。
GAD(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0059)÷2.0976]×(V2÷V3)÷(500×V1÷V)÷T×103
=0.8×(△A+0.0059)
5、按照液体体积计算：
单位定义：每毫升液体每分钟产生 1nmol 的 GABA 定义为一个酶活力单位。
GAD(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0059)÷2.0976]×(V2÷V3)÷V1÷T=397.3×(ΔA+0.0059)
V－－-提取液体积，1mL；
V1－－-加入反应体系中样本体积，0.1mL；
V2－－-反应体系总体积：0.5mL； V3－－-第②步显色阶段上清液量，0.2mL； T－－-反应时间，30min；
W－－-样本质量，g；
标准品 GABA 分子量－－-103.12； 500－－-细胞数量，万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
标准品母液（1mg/mL）：向 EP 管中加入 2mL 蒸馏水；把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,
0.06, 0.12, 0.18, 0.24, 0.3 mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
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