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内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶试剂盒
价格：￥600
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/8 10:40:44更新时间：2024/11/21 9:51:30
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：160
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金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶试剂盒说明书
（货号：WS3350F 分光法 48 样）
一、产品简介：
内切-β-1,4-葡聚糖酶（EC3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份
，这类酶随机水解β-1,4-糖苷键，将无定形长链纤维素分子截短，将其分解成葡萄糖、
纤维二糖、纤维三糖等各种类型的还原糖，在碱性条件下，产生的还原糖能与3,5-二硝基
水杨酸反应生成棕红色物质，该物质在540nm下有大吸收峰，即可得出内切-β-1,4-葡聚
糖酶的酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 33mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×1 瓶
4℃保存
临用加 16.5mL 试剂一，80℃水
浴，搅拌至溶解，仍 4℃保存。
试剂三
液体 33mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、离心机、可调式移液器、研
钵、冰和蒸馏水。
四、内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织：称取约 0.2g 组织（水分充足的样本可取 1g），加入 1mL 经预冷的 95%乙醇冰
浴匀浆，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入
经预冷的 80%乙醇混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀。
再向沉淀中加入 1mL 经预冷提取液，涡旋混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心
10min；留上清，弃沉淀。上清液置冰上待测。
② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间
隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：若是澄清液体，直接检测，若液体样本浑浊，需 4℃×12000rpm，离心 10min，
取上清液检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
300
试剂二
300
37℃孵育 60min本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
300
300
混匀，95℃水浴 5min，取出后用自来水或冰水冷却至室温，
取全部澄清液体于 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，在
540nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样
本做一个对照管）。
【注】若ΔA 在零附近，可增加样本取样质量 W 或增加样本加样体积 V1（如增至 150μL，
则试剂三相应减少），则改变后的 W 和 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 0.0099x - 0.0747；x 为标准品质量（μg），y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0747)÷0.0099]÷(Cpr×V1) ÷T
=1010.1×( ΔA+0.0747)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位定义：每克组织每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0747)÷0.0099]÷(W×V1÷V) ÷T
=1010.1×( ΔA+0.0747)÷W
4、按细菌/细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg /h/104 cell)=[( ΔA+0.0747)÷0.0099]÷(500×V1÷V)
÷T=2×(ΔA+0.0747)
5、按液体体积计算
单位定义：每毫升液体每小时催化产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
内切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维素酶活力(μg /h/mL)=[( ΔA+0.0747)÷0.0099]÷V1 ÷T
=1010.1×( ΔA+0.0747)
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.1mL；
T－－-反应时间，60min=1 小时；
W－－-样本质量，g；
500－－-细菌或细胞总数，500 万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（2mg/mL）：从标准品管中称量取出 4mg 至一新 EP 管中，再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 2mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2. mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据对照管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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