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总蛋白酶活性试剂盒微板法
价格：￥1020
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/9 15:16:38更新时间：2024/10/11 9:25:41
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：157
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
总蛋白酶试剂盒说明书
(货号：WS3121W 微板法 48 样)
一、产品简介：
蛋白酶活力通常利用天然底物和合成底物进行测定。各种蛋白酶均可水解天然底物
酪蛋白因此由酪蛋白测得的活力是蛋白酶的总活力。
本试剂盒利用总蛋白酶催化水解偶氮酪蛋白，生成的产物于 366nm 有光吸收，通
过测定吸光值的变化得出总蛋白酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存条件
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部，
再加13mL的蒸馏水混匀备用。
试剂二
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 36mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、总蛋白酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔
10s，重复 30 次）；4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 366nm。
② 所有试剂解冻至室温或于 25℃水浴锅中孵育 20min。
③ 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
120
120
试剂一
120
试剂二
120
120
混匀，30℃孵育 60min
试剂三
360
360
试剂一
120
立即混匀，低温（放冰上）静置 5min；室温 12000rpm
离心 5min，直接取 200μL 至 96 孔板中，于 366nm 处读
值。ΔA=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。
【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可以延长 30℃孵育时间 T（如延长至 90min）或增加样本取样
质量 W（如增至 0.2g），则改变后的反应时间 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本鲜重计算：
定义：每克组织每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。
总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/g 鲜重)=ΔA÷1÷(W×V1÷V)÷T=8.3×ΔA÷W
2、按样本蛋白浓度计算：
定义：每毫克组织蛋白每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。
总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/mg prot)=ΔA÷1÷(V1×Cpr)÷T=8.3×ΔA÷Cpr
3、按细菌/细胞数量计算：
定义：每 104个细菌/细胞每小时反应体系中变化 1 个吸收单位为 1 个偶氮酪蛋白单位。
总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/104 cell)=ΔA÷1÷(500×V1÷V)÷T=0.02×ΔA÷Cpr
4、按照液体体积计算：
定义：每毫升液体每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。
总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/mL)=ΔA÷1÷V1÷T=8.3×ΔA
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.12mL；
W－－-样本质量，g；
T－－-反应时间，60min=1h；
500－－-细胞数量，万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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