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乙酰辅酶A羧化酶(ACC)试剂盒(定磷法)微板法
价格：￥1620
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/9 16:03:47更新时间：2024/11/13 9:36:34
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：166
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
乙酰辅酶 A 羧化酶(Acetyl CoA carboxylase，ACC)试剂盒说明书
（货号：WS3190W 微板法 48 样）
一、产品简介：
乙酰辅酶A羧化酶（ACC，EC 6.4.1.2）广泛存在于生物界。在生物体内催化乙酰辅酶A
羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定
程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
ACC 催化乙酰辅酶 A、NaHCO3和 ATP 生成丙二酰辅酶 A、ADP 和无机磷，通过钼酸
铵定磷法测定无机磷的增加量来测定 ACC 酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置用新枪头和玻璃移液器等，也可用一次性塑料器皿，避免磷污染。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、乙酰辅酶 A 羧化酶（ACC）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心
15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细胞样本：
先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细胞加入 1mL 提取液；超声波破
碎细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；4ºC 约 12,000rpm
离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，设置温度 37℃，调节波长至 700nm。
② 试剂放在 37℃水浴 5min；
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL ×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 支
-20℃保存
用甩几下使试剂落入底部，再加
0.55mL 蒸馏水，混匀溶解备用。
试剂三
液体 4mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
A:粉体 mg×1 瓶
B:液体 2mL×1 瓶
4℃保存
临用加1.8mL的B液，再加23.2mL
的蒸馏水，混匀溶解备用。
标准品
粉体 mg ×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
试剂名称（μL）
测定管
对照管
试剂一
190
200
样本
100
100本试剂盒仅供科研使用
2
④ 显色反应，在 96 孔板中依次加入：
【注】若△A 差值小于 0.01，可增加样本取样质量 W（如增至 0.2g），或增加③步中样本加样体
积 V1(如由 100μL 增至 200μL，则试剂一相应减少)，或延长③步中 37℃条件下孵育时间 T
（如由 30min 延至 60min），则改变后的 W 和 V1 和 T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.6402x - 0.0034，x 是标准品摩尔质量（μmol/mL）, y 是△A。
2、按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/mg prot)=[(△A+0.0034)÷0.6404×V2] ÷(V1×Cpr)÷T
=10.62×(△A+0.0034)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/g 鲜重)=[(△A+0.0034)÷0.6404×V2]÷(W× V1÷V)÷T
=10.62×(△A+0.0034)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 1 万个细菌或细胞分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h /104 cell)=[(△A+0.0034)÷0.6404×V2]÷(500×V1÷V)÷T=0.021×(△A+0.0034)
V－－-加入提取液体积，1mL；
V1－－-加入样本体积，0.1mL； V2－－-酶促反应总体积，0.34mL；
T－－-反应时间，1/2 小时；
W－－-样本鲜重，g；
500－－-细菌或细胞总数，500 万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（50μmol/mL）：标准品用 1mL 试剂一溶解。（母液需在两天内用）。
2
把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样
本来调整标准品浓度。
3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
试剂二
10
37℃ 孵育 30min
试剂三
40
40
混匀，12000rpm，4℃离心 5min，上清液待测。
上清液
50
50
试剂四
200
200
混匀，室温静置 3min，700nm 下读取各管吸光值，
△A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
