本试剂盒仅供科研使用
土壤几丁质酶试剂盒说明书
(货号:WS5330F 分光法 24 样)
一、产品简介:
多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶,土壤中几丁质酶主要水解几丁质多
聚体产生 N-乙酰氨基葡萄糖,该产物进一步与铁氰hua钾反应,于 420nm 处检测,进
而计算得到土壤几丁质酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 18mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,
再加 1.5mL 盐酸充分混匀溶解
后,再加 1.7mL 蒸馏水混匀备用。
试剂三
粉体 mg×1 支
-20℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,
再加 1.2mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
液体 19mL×1 支
4℃保存
试剂五
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂六
粉体 g×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,
再加 30mL 蒸馏水溶解备用。
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、天平、水浴锅、低温离心机、盐酸、
蒸馏水。
四、土壤几丁质酶活性测定:
1、样本制备:
取新鲜土样或 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 420nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
土样(g)
0.1g
0.1g
试剂一
300
400
试剂二
100
混匀,37℃(恒温培养箱)孵育 3h,4000rpm 离心 5min,取上清。
③ 在 EP 管中依次加入:
上清液
200
200
试剂三
10
10
试剂四
370
370
混匀,37℃孵育 1h。
试剂五
120
120
混匀,4000rpm 离心 5min,取上清液待测。
④ 在 EP 管中依次加入:本试剂盒仅供科研使用
2
上清液
360
360
试剂六
480
480
混匀,95-100℃煮沸 10min,若有沉淀,于 12000rpm 室温离心 5min,
取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中于 420nm 处读取各管吸光值
A,ΔA=A 对照-A 测定(每个样本做一个自身对照)。
【注】若ΔA 较小,可以加大样本量(如增至 0.2g),或延长 37℃的孵育时间(由 3h 增加
至 5h 或更长),则改变后的样本重量 W 和反应时间 T 需代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、 标准曲线方程:y = 0.0248x + 0.0024,X 是标准品质量(μg),y 是ΔA。
2、按照样本重量计算:
酶活定义:每克土壤每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。
土壤几丁质酶活性(μg/h/g 土壤)=[(ΔA-0.0024)÷0.0248×3.89]÷W÷T
=52.3×(ΔA-0.0024)÷W
T---反应时间,3h;
W---样本质量,g;
3.89---体积系数;
标准品分子量---221.21;
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):标准品临用加 2mL 蒸馏水,即为 1mg/mL。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
3 依据第④步骤的加样体系:360μL 标准品+480μL 试剂六,混匀,95-100℃煮沸 10min,
取全部液体至 1mL 玻璃比色皿中于 420nm 处读取各管吸光值 A,标准品的质量作
为横坐标,0 mg/mL 对应的 A 值减去各浓度标准品对应的 A 之差作为纵坐标,即可
得出标准曲线。