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UDPG焦磷酸化酶/尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶试剂盒微板法
价格：￥3950
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/13 14:42:24更新时间：2024/9/3 10:33:32
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：159
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质粒
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金标渗滤卡
金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）试
剂盒说明书
（货号：WS5350W
微板法 96 样）
一、产品简介：
UDPG 焦磷酸化酶（UGP，EC 2.7.7.9）是碳水化合物代谢的重要指标，广泛
分布于自然界中，在微生物及动植物的许多组织中都有存在。催化葡萄糖活化，将 1-
磷酸葡萄糖与 UTP 分子合成为 UDP-葡萄糖（UDPG）。为各类碳水化合物包括蔗糖、
葡聚糖、纤维素、半纤维素、果胶质、糖蛋白等的合成提供葡萄糖基。
UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶
作用下将 NADP 转化为 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体120mL×1
瓶
4℃保存
试剂一
液体15mL×1瓶
4℃保存
试剂二
粉体×1支
-20℃保存
临用加1.1mL试剂一溶解，
仍-20℃保存。
试剂三
粉体mg×1瓶
4℃保存
临用加 5.4mL 去离子水溶解。
试剂四
粉体mg×1瓶
4℃保存
临用加 5.4mL 去离子水溶解。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、研钵、蒸馏水。
四、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UGP）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.2g），加 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：也可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细胞样本：
取 500 万细胞加入 1mL 提取液；超声波破碎细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比例进行
提取
③ 液体样品：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度为 30℃。
② 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
10
试剂一
80
试剂二
10本试剂盒仅供科研使用
2
【注】1. 若ΔA 差值在零附近徘徊，可以延长反应时间 20min 后读取 A2，则相应的
反应时间 T 则代入计算公式重新计算；
或者加大样本上样量（如：由 10μL 增加到 20μL，则试剂一相应减少，保持
总体积 200μL 不变），改变后的加样体积即 V1 代入计算公式重新计算；
或者由 0.1g 样本取样量增加到 0.2g，加 1mL 的提取液研磨提取。
2. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性
上升的时间段来参与计算，相对应的 A1 和 A2 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min/mg prot）＝[△A÷（ε×d）×V2×109]÷（V1×Cpr）÷T
=1607.8×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /g 鲜重）＝[△A÷（ε×d）×V2×109]÷（W ×V1÷V）÷T
=1607.8×△A÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活定义：每 104 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /104 cell）= [△A÷（ε×d）×V2×109]÷(500×V1÷V) ÷T
=3.2×△A
（4）按照液体体积计算
酶活定义：每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mL）=[△A÷（ε×d）×V2×109]÷V1÷T=1607.8×△A
ε－－-NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
V－－-加入提取液体积，1mL；
V1－－-加入样本体积，0.01mL；
V2－－-反应体系总体积，2×10-4 L；
d－－-96 孔板光径，0.5cm；
T－－-反应时间，4min；
500－－-细胞总数，500 万；
W－－-样本质量，g ；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
试剂三
50
轻轻混匀，30℃孵育 10min。
试剂四
50
轻轻混匀，反应开始，1min 时在 340nm 处读取吸光值 A1，
5min 时读取 A2，△A=A2-A1。
