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△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)试剂盒微板法
价格：￥1300
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/13 15:37:15更新时间：2024/11/22 9:18:56
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：160
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）试剂盒说明书
（货号：WS4011W 微板法 48 样）
一、产品简介：
Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）是植物体内脯氨酸生物合成的关键酶，同时也是植
物在遭受胁迫时脯氨酸合成的限速酶；脯氨酸作为一种渗透调节物质，与植物对干旱和
盐胁迫的适应性密切相关。所以 P5CS 在调节脯氨酸的代谢水平上具有重要作用。
Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）催化谷氨酸转化成γ-谷氨酸半醛，同时使 NADPH
氧化成 NADP+，通过检测 NADPH 在 340nm 处的下降速率，即可得出 P5CS 酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用甩几下，使粉体落到底部，
再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉体 mg×2 支
-20℃保存
临用甩几下，使粉体落到底部，
每支分别加
入 0.6mL 蒸馏水溶解备
用，用不完的试剂分装后
-20℃保
存，禁止反复冻融，三天内用完。
试剂三
液体 13mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉体 mg×2 支
4℃保存
临用甩几下，使粉体落到底部，
再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、 样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清液待用。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清检测。
2、 上机检测：
1
酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
2
所有试剂解冻至室温。
3
制备对照管样本：取出同一个样本的部分上清液至一新 EP 管中，于 95℃水浴中煮沸
10min 后取出，冷却至室温后于 12000rpm，4℃或者室温离心 10min，取离心后的上
清液作为该样本的对照管样本备用。
4
在 96 孔板中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
40
40（煮沸的样本）
试剂一
10
10
试剂二
10
10
试剂三
130
130
试剂四
10
10
混匀，室温（25℃）下，30s 时立即于 340nm 处分别读取
吸光值 A1，10min 后读取 A2，△A=（A1-A2）测定
-
（
A1-A2）
对照（每个样本需做一个自身对照）。
【注】1. 若ΔA 的值在零附近徘徊，则可延长反应时间 T（如增至 40min 或更长），或加大样本
量 V1（如增至 60μL，则试剂三相应减少），则改变后的反应（孵育）时间 T 或加样体
积 V1 需代入计算公式重新计算。
2. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对
会偏高），可以适当减少样本加样量（则试剂三相应增加），则改变后的加样体积需代
入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
P5CS 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=160.8×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
P5CS 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=160.8×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活单位（U）。
P5CS 活性(nmoL/min /104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.322×△A
4、液体中 P5CS 活力的计算：
单位定义：每毫升液体在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
P5CS 活性(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=160.8×ΔA
V－－-提取液体积，1mL；
V1－－-加入反应体系中样本体积，0.04mL；
V2－－-反应体系总体积：2×10-4 L；
d－－-96 孔板光径，0.5cm；
T－－-反应时间，10min；
W－－-样本质量，g；
ε－－-NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
