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β-半乳糖苷酶(β-GAL)试剂盒微板法
价格：￥1070
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/14 17:15:10更新时间：2024/12/26 14:28:07
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：159
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL）试剂盒说明书
（货号：WS4250W 微板法 48 样）
一、产品简介：
β-半乳糖苷酶（β-GAL，EC 3.2.1.23)又称β-D-半乳糖苷半乳糖基转移酶，简称乳糖酶，
一性作用于β-D-半乳糖苷类化合物的酶，广泛用于生化分析、医学和食品等域。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，β-GAL 分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳
糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 405nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算
β-GAL 活性。
二、测试盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
临用加 1.5ml 水。
试剂二
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液 20mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰。
四、β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，冰浴
匀浆，然后 12000rpm，4℃，离心 10min，取上清作为粗体液，置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，
间隔 10s，重复 30 次）；15000 rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积（mL)为 500~1000:1 比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，温度设定 37℃，波长设定为 405nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
10
10
试剂一
25
蒸馏水
25
试剂二
35
35
迅速混匀，37℃保温 30min
试剂三
180
180
混匀，取 200μL 转移到 96 孔板中， 405nm 处测定吸光值本试剂盒仅供科研使用
2
A，ΔA=A 测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：若ΔA 过小，可增加样本上样量 V1（如增至 30μL，则试剂三相应减少），或延长保
温时间（如：40min 或更长），则改变后的 V1 或 T 需重新代入计算公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0438x - 0.0008：x 是标准品 PNP 的质量（nmol），y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GAL 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0008)÷0.0438]÷(V1×Cpr)÷T=76.1×(ΔA+0.0008)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GAL 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0008)÷0.0438]÷(W×V1÷V)÷T=76.1×(ΔA+0.0008)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GAL 活性(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0008)÷0.0438]÷(500×V1÷V)÷T=0.152×(ΔA+0.0008)
5、按液体体积：
单位定义：每毫升液体每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GAL 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0008)÷0.0438]÷V1÷T=76.1×(ΔA+0.0008)
V－－-加入提取液体积，1mL；
V1－－-加入反应体系中样本体积，0.01mL；
W－－-样本质量，g；
T－－-反应时间，30min；
PNP 对分子质量－－-139.11；
500－－-细胞或细菌数量，万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3mg/mL。也
可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入：10μL 标准品+25μL 蒸馏水+35μL 试剂二+180μL 试剂三，混匀，取
200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
热门标签：β-半乳糖苷酶(β-GAL)试剂盒
