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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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ADPG焦磷酸化酶/腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶试剂盒微板法

价格:¥4450

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:96T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/16 10:21:12更新时间:2024/8/29 13:26:48

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

产品完善度: 访问次数:156

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase
AGP)活性测定试剂盒说明书
(货号:WS6350W 微板法 96 样)
一、产品简介:
ADPG 焦磷酸化酶(AGPEC 2.7.7.27)是植物淀粉合成过程中起关键性调节作用的酶,
催化 l-磷酸葡萄糖(G-1-P)与三磷酸腺苷(ATP)反应形成淀粉合成的直接体腺苷二磷酸葡
萄糖(ADPG),在植物中,主要存在于贮藏器官和叶片中。
AGP 催化的逆向反应生成 G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖
脱氢酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH340nm 下测定 NADPH 增加速率,即可
计算 AGP 活性。
二、测试盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体120mL×1
4℃保存
试剂一
粉体mg×1
-20℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,再
1.1mL蒸馏水溶解,仍-20℃保存。
试剂二
粉体mg×1
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,再
1.1mL蒸馏水溶解。仍4℃保存。
试剂三
液体13mL×1
4℃保存
试剂四
粉体mg×1
-20℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,再
2.1mL 蒸馏水溶解,仍-20℃保存。
【注】:粉剂量在 mg 别,使用用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
组织样本:
称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.2g),加 1mL 提取液,进行冰浴匀浆,
12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:也可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。
【注意】 若样本颜色较深(如较深颜色的植物叶片),可引起起始值 A1 值较大如超过 1.5,可在样本
制备过程中增加除色素步骤:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 80%乙醇冰浴匀浆,
12000rpm4离心 10min,弃掉色素较深的上清液;以上除色素步骤重复 2 次。后向离心得到的
沉淀中加入 1mL 提取液,混匀或再次冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,取上清置冰上待测。
液体样品:澄清的液体样本直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,设定温度为 30℃。
② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 96 孔板中依次加入:
试剂名称(μL
测定管
样本
40
试剂一
10本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
10
试剂三
120
轻轻混匀,30℃孵育 10min
试剂四
20
轻轻混匀,反应开始,30℃条件下,30S 340nm 处读取
吸光值 A130min 后读取 A2,△A=A2-A1
【注】1. ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T 60min 后或更长读取 A2;或加大样本上样量
V1(如增至 80μL,则试剂三相应减少,保持总体积不变);或增加样本取样质量 W
则改变后的 T V1 以及 W 需代入计算公式重新计算;
2. 若上升趋势不稳定,可以每隔 10S 读取一次吸光值,选取一段线性上升的时间段来参与
计算,相对应的 A1 A2 值也代入计算公式重新计算。
3. 若△A 的值大于 0.4,需缩减反应时间 T(如减至 10min 或更短),或减少样本上样量 V1
(如减至 20μL,则试剂三相应增加,保持总体积不变);则改变后反应时间 T V1
代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min /mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=53.6×ΔA÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
酶活定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=53.6×ΔA÷W
3、按照液体体积计算:
酶活定义:每毫升液体每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T =53.6×ΔA
ε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cm
V---加入提取液体积,1mL
V1---加入样本体积,0.04mL
V2---反应体系总体积,2×10-4 L
d---比色皿光径,0.5cm
T---反应时间,30min
W---样本质量,g
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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