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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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亚硝酸还原酶(NiR)试剂盒

价格:¥860

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:48T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/16 10:57:08更新时间:2024/7/15 8:50:26

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
亚硝酸还原酶(Nitrite reductaseNiR)试剂盒说明书
(货号:WS8040F 分光法 48 样)
一、产品简介:
亚硝酸还原酶(NiREC1.7.2.1)是一类能催化亚硝酸盐还原的氧化还原酶,广泛存在于微生物及植
物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为 NO NH3,从而减少环境中亚硝态
氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
亚硝酸还原酶可将 NO2 -还原为 NO,使样品中参与对氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成(粉)红色偶氮化
合物的 NO2 -减少,根据颜色深浅即 540nm 处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1
4℃保存
试剂一
粉体 mg×4
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,每
支加 1.5mL 提取液溶解。
试剂二
粉剂 mg×1
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,再
4mL 提取液溶解。
试剂三
试剂三 Amg×2
试剂三 Bmg×2
4℃保存
临用一支试剂 A B 分别用
1mL 蒸馏水完全溶解,再把 1mL
试剂 B 倒入 1mL 试剂 A 中混成
剂三 mix(一周内用完)
试剂四
粉体 g×1
4℃保存
临用加 6mL 蒸馏水溶解。
试剂五
液体 24mL×1
4℃保存
临用,可依据待检测样本数量,
把试剂五和六等比例混合成无色
的反应 mix(注意观察,若变粉色,
则不能使用)。 两天之内用完。
试剂六
液体 24mL×1
4℃保存
标准品
粉体 mg×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、天平、研钵、水浴锅、
低温离心机。
四、亚硝酸还原酶(NiR)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:称取约0.1g组织,加入1mL提取液,进行冰浴匀浆。
4℃×12000g 离心10min
取上清,置冰上待测。
② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞
加入 1mL 提取液;超声波破碎细菌或细胞(冰浴,300W,超声 3s,间隔 7s,总时间
3min); 4℃×12000g 离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,按照细菌/细胞数量(104):提取液体积(mL)500~10001 的比例进行提取。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30min,调波长至 540nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入试剂:
试剂名称(μL
测定管
对照管
试剂一
50
50本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
50
提取液
330
430
样本
20
20
试剂三 mix
50
混匀(此时反应液应为深蓝色),于 37℃下反应 30min 后,立即于漩涡
震荡仪上剧烈震荡直到颜色完全消失。
试剂四
50
50
混匀,12000rpm,室温离心 5min,上清液待测。
③ 显色反应,在 EP 管中依次加入:
上清液
80
80
蒸馏水
400
400
反应 mix
400
400
混匀,室温反应 10min立即取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿(光径
1cm)中,于 540nm 处读取吸光值 AA =A 对照- A 测定(每个测定
管需设一个对照管)。
【注】:1. A 值在零附近徘徊,可增加样本体积 V1(如增至 50μL 或更多,则提取液相应减少),或延
长反应时间 T(如增至 1h),则改变后的 V1 T 代入计算公式重新计算。
2. A 值需小于 0.8,若大于则需减少样本体积 V1(如减至 10μL 或更少,则提取液相应增加),
或缩短反应时间 T(如减至 10min),则改变后的 V1 T 代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 3.2526x + 0.0114x 为标准品摩尔浓度(μmol/mL),y 为吸光值A
2、按照蛋白含量计算:
酶活定义:每毫克组织蛋白每小时还原 1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h/mg prot)=[(A-0.0114)÷3.2526×V2]÷(V1×Cpr)÷T=16.91×(A-0.0114)÷Cpr
3. 按照样本质量计算:
酶活定义:每克组织每小时还原 1μmol NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h/g 鲜重)=[(A-0.0114)÷0.3127×V2]÷(W×V1÷V)÷T=16.91×(A-0.0114)÷W
4. 按照细胞数量计算:
酶活定义:每 104个细胞每小时还原 1μmol NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h /104 cell)=[(A-0.0114)÷0.3127×V2]÷(细胞数量×V1÷V)÷T
=16.91×(A-0.0114)÷细胞数量
V1---体系中加入样本体积,0.02mLV---加入提取液体积,1mL
V2---反应阶段总体积,0.55mL
T---反应时间,30min=1/2h; 细胞数量---500 万;
W---样本质量,gCpr---样本蛋白含量,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒;
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(100μmol/mL):标准品用 1mL 蒸馏水溶解。(母液在两天内用完)。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2,0.25. μmol/mL
3 按照显色反应阶段的加样顺序操作:根据结果即可制作标准曲线。

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