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亚硝酸还原酶(NiR)试剂盒微板法
价格：￥1220
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/16 10:58:40更新时间：2024/11/7 14:33:02
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：159
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
亚硝酸还原酶（Nitrite reductase，NiR）试剂盒说明书
（货号：WS8040W 微板法 96 样）
一、产品简介：
亚硝酸还原酶（NiR，EC1.7.2.1）是一类能催化亚硝酸盐还原的氧化还原酶，广泛存在于微生物及植
物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3，从而减少环境中亚硝
态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
亚硝酸还原酶可将 NO2 -还原为 NO，使样品中参与对–氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成（粉）红色偶氮
化合物的 NO2 -减少，根据颜色深浅即 540nm 处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
用摇匀，且用蒸馏水稀释一倍后
做为提取液使用。
试剂一
粉体 mg×4 支
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，每
支加 3mL 提取液溶解。
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，再
加 6mL 提取液溶解。
试剂三
试剂三 Amg×3 支
试剂三 Bmg×3 支
4℃保存
临用一支试剂 A 和 B 分别用 1mL
蒸馏水完全溶解，再把 1mL 试剂 B
倒入 1mL 试剂 A 中混成试剂三
mix(一周内用完)。
试剂四
粉体 g×1 瓶
4℃保存
临用加 12mL 蒸馏水溶解。
试剂五
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
临用，可依据待检测样本数量，
把试剂五和六等比例混合成无色的
反应 mix（注意观察，若变粉色，
则不能使用）。 两天之内用完。
试剂六
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、研钵、水浴锅、低温离心机。
四、亚硝酸还原酶（NiR）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，
取上清，置冰上待测。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，300W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min）；10000g 4℃离
心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，按照细菌/细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
② 在 EP 管中加入下列试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管本试剂盒仅供科研使用
2
试剂一
50
50
试剂二
50
提取液
330
430
样本
20
20
试剂三 mix
50
混匀（此时反应液应为深蓝色），于 37℃下反应 30min 后，立即于漩涡
震荡仪上剧烈震荡直到颜色完全消失。
试剂四
50
50
混匀，12000rpm，室温离心 5min，上清液待测。
③ 显色反应，在 96 孔板中依次加入：
上清液
20
20
蒸馏水
100
100
反应 mix
100
100
混匀，室温反应 10min，立即于 540nm 处分别读取吸光值 A，△A =A
对照- A 测定（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：1. 若△A 值在零附近徘徊，可增加样本体积 V1（如增至 50μL 或更多，则提取液相应减少），或延
长反应时间 T（如增至 1h），则改变后的 V1 或 T 代入计算公式重新计算。
2. △A 值需小于 1，若大于则需减少样本体积 V1（如减至 10μL 或更少，则提取液相应增加），或
缩短反应时间 T（如减至 10min），则改变后的 V1 或 T 代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 1.8966x + 0.0119；x 为标准品摩尔浓度（μmol/mL），y 为△A。
2、按照蛋白含量计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每小时还原 1μmol NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h/mg prot)=[(△A-0.0119)÷1.8966×V2]÷(V1×Cpr)÷T=29×(△A-0.0119)÷Cpr
3、按照样本质量计算：
酶活定义：每三克组织每小时还原 1μmol NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR(μmol/h/g 鲜重)=[(△A-0.0119)÷1.8966×V2]÷(W×V1÷V)÷T=29×(△A-0.0119)÷W
4、按照细菌/细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每小时还原 1μmol NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/104 cell)=[(△A-0.0119)÷1.8966×V2]÷(细胞数量×V1÷V)÷T
=29×(△A-0.0119)÷细胞数量
V－－-加入提取液体积，1mL；
V1－－-体系中加入样本体积，0.02mL；
V2－－反应阶段总体积，0.55mL；
T－－-反应时间，30min=1/2h； 细胞数量－－-500 万；
W－－-样本质量，g； Cpr－－-样本蛋白含量，建议使用本公司 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（100μmol/mL）：标准品用 1mL 蒸馏水溶解。（需两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4,0.5. μmol/mL。本试剂盒仅供科研使用
3 按照显色反应阶段的加样顺序操作：根据结果即可制作标准曲线。
3
热门标签：亚硝酸还原酶(NiR)试剂盒
