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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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β-1,3-1,4-葡聚糖酶活测定试剂盒微板法

价格:¥1420

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:96T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/16 16:02:27更新时间:2024/11/15 8:50:02

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

产品完善度: 访问次数:162

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
β-1,3-1,4-葡聚糖酶(β-1,3-1,4-glucanase)酶活试剂盒说明书
(货号:WS4750W 微板法 96 样)
一、产品简介:
β-1,3-1,4-葡聚糖酶(又称地衣多糖酶;EC 3.2.1.73)是一类重要的水解酶,可以水解谷物
中的β-1,3-1,4-葡聚糖,其在食品、饲料和纺织等域的具有重要应用价值。
β-1,3-1,4-葡聚糖酶水解底物葡聚糖产生还原性糖。利用 3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的
量,在 540nm 读取吸光值,进而得出β-1,3-1,4-葡聚糖酶的活性大小。
二、试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1
4℃保存
临用甩几下使粉剂落入底
部,再加 1.1mL 蒸馏水,80℃
水浴 10min 充分溶解,冷却至
室温待用。
试剂三
液体 30mL×1
4℃保存
标准品
粉体 mg×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、β-1,3-1,4-葡聚糖酶(β-1,3-1,4-GA)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g)到研钵内,加入 1mL 提取液,在冰上进
行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。
② 细菌/真菌样本:
先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液;
冰浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
:也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
③ 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4℃×12000rpm,离心 10min
取上清液检测。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm
② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 EP 管中依次加入
试剂名称(μL
测定管
对照管
样本
50
50
试剂一
140
150
试剂二
10
混匀,37℃孵育 30min
试剂三
150
150本试剂盒仅供科研使用
2
混匀,95℃水浴 5min,取出后用自来水或冰水冷却至室温,
200μL 澄清液体于 96 孔板中,在 540nm 处读取吸光值
AΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个对照管)。
【注】:ΔA 在零附近徘徊,可在样本制备时加大取样质量 W(如增至 0.5g,或在上机检测
时加大上样量 V1(由 50μL 增加到 100μL,则试剂一相应减少,保持总体积不变),
或延长反应时间 T(如增至 60min,则改变后的 WV1 T 需带入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 0.0123x - 0.035x 为标准品浓度(μg),y ΔA
2、按蛋白浓度计算:
酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(V1×Cpr) ÷T
=54.2×(ΔA+0.035)÷Cpr
3、按样本鲜重计算:
酶活定义:每克组织样本每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(W×V1÷V) ÷T
=54.2×(ΔA+0.035)÷W
4、按细菌/真菌数量计算:
酶活定义:每 1 万个细菌或真菌每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min /104 cell)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(500×V1÷V) ÷T=0.11×(ΔA+0.035)
5、按液体体积计算:
酶活定义:每毫升液体中每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min/mL)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷V1÷T=54.2×(ΔA+0.035)
V---提取液体积,1mL
V1---样本上样体积,50μL =0.05mL
T---反应时间,30min
W---样本鲜重,g
500---细菌/真菌总数,500 万;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据 50μL 标准品+150μL 试剂一+150μL 试剂三,混匀 95℃水浴 5min,取出后用自
来水或冰水冷却至室温,取 200μL 澄清液体于 96 孔板中,在 540nm 处读取吸光值
A,根据结果即可制作标准曲线。

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