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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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腺苷脱氨酶(ADA)活性测定试剂盒微板法

价格:¥380

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:96T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/17 11:12:23更新时间:2023/11/17 11:12:23

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase, ADA)活性测定试剂盒说明书
(货号:WS8340W 微板法 96 )
一、产品简介:
腺苷脱氨酶(ADAEC 3.5.4.4)是一种琉基酶,是嘌呤核苷酸代谢的关键酶,与机体
细胞的免疫活性有重要关系。
腺苷脱氨酶(ADA)催化腺嘌呤核苷水解,产生次黄嘌呤核苷和氨,利用氨在强碱的
环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm
有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×2
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部,每瓶
再加 11mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体 20mL×1
4℃保存
试剂四
液体 12mL×1
4℃保存
试剂五
液体 6mL×1
4℃保存
试剂六
A:液体 3.5mL×4
B:液体μL×1
4℃保存
临用取 30μL B 液进一瓶 A 液中,
混匀后作为试剂六使用。混匀后的试
剂六一周内用完。
标准管
液体 mL×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该标曲。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
四、腺苷脱氨酶(ADA)活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g),加入 1mL 提取液;进行
冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。
② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 630nm
② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 EP 管依次加入:
试剂名称(μL
测定管
对照管
样本
40
40
试剂一
100
100
试剂二
100
试剂三
100
混匀,放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 30min
试剂三
100
试剂二
100
混匀,室温 12000rpm 离心 5min,上清液待测。
③ 显色反应:在 96 孔板中依次加入:
试剂名称(μL
测定管
对照管本试剂盒仅供科研使用
2
上清液(上步反应)
30
30
蒸馏水
30
30
试剂四
60
60
试剂五
30
30
试剂六
60
60
充分混匀,37℃放置 20min 后,于 630nm 处读取吸光值 A
ΔA=A 测定管-A 对照管(每个样本做一个自身对照)。
【注】1. 试剂四和五和六需分开加,不能事先混匀。
2. ΔA 的值较小,可增加 37℃孵育时间(如增至 1 小时或更长),或在显色阶段增加上清液量
V1(如增至 60μL,则蒸馏水体积相应减少);则改变后的 T V1 需代入计算公式重新计算。
3. A 测定大于 1.5,可减少 37℃孵育时间(如减至 10min 或更短),或在显色阶段减少上清液
V1(如减至 15μL,则蒸馏水体积相应增加);则改变后的 T V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程为 y = 58.121x - 0.0118x 为标准品摩尔质量(μmoL),y 为吸光值ΔA
2、按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每毫克蛋白质每小时催化腺苷生成 1μmoL 氨定义为一个酶活力单位。
ADA(μmoL/h/mg prot)=(ΔA+0.0118)÷58.121×(V2÷V3)÷(V1×Cpr)÷T
=9.75×(ΔA+0.0118)÷Cpr
3、按样本鲜重计算:
单位定义:每克组织每小时催化腺苷生成 1μmoL 氨定义为一个酶活力单位。
ADA (μmoL/h/g 鲜重)=(ΔA+0.0118)÷58.121×(V2÷V3)÷(W×V1÷V)÷T
=9.75×(ΔA+0.0118)÷W
4、按照液体体积计算:
单位定义:每毫升液体每小时催化腺苷生成 1μmoL 氨定义为一个酶活力单位。
ADA (μmoL/h/mL)=(ΔA+0.0118)÷58.121×(V2÷V3)÷V1÷T=9.75×(ΔA+0.0118)÷W
V---提取液体积,1mL
V1----加入②歩反应体系中样本体积,0.04mL
V2---②歩反应体系总体积:0.34mL
V3---③歩显色步骤中上清液体积,0.03mL
T---反应时间,0.5h
W---样本质量;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1 标准品母液(10μg/mL 的氨(分子量是 18)),把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度
的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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