本试剂盒仅供科研使用
植物硝态氮试剂盒说明书
(货号:WS9040F 分光法 48 样)
一、产品简介:
硝态氮是植物主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况,
可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养
情况,而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
在浓酸条件下,NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,硝基水杨酸在强碱条件下呈黄
色,该黄色物质在 410nm 处有大光吸收,通过比色测定进而计算得植物硝态氮含量。
二、试剂盒的组成和配制:
【注】:粉剂量在 mg 别,使用用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 的玻璃比色皿(光径 1cm)、天平、常温离心机、水浴锅、可
调式移液器、浓硫酸。
四、植物硝态氮含量测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g,加入 1mL 蒸馏水,室温匀浆后,置于沸水浴中浸提 30min(期间不断
晃动),待冷却后于 25℃,12000rpm 离心 15min,取上清待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌/细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水;
超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),
置于沸水浴中浸提 30min(期间不断晃动),待冷却后于 25℃,12000rpm 离心 15min,
取上清待测。
[注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例提取。
③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min,调节波长至 410nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
空白管(仅做一次)
样本
10
蒸馏水
10
试剂一
40
40
室温(25℃)反应 10min
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂×2 支
4℃保存
用甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底部,每
支再加 1.5mL 浓硫酸充分溶解,4℃避光保存 1
周。
试剂二
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
标准品
自备
若重新做标曲,则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
(沿着管壁务必缓慢加入)
950
950
混匀,取 0.8mL 于 1mL 的玻璃比色皿中,410nm 处读取吸光值
A,△A=A 测定管-A 空白管。
【注】试剂一和试剂二含有强酸强碱物质,需做好实验防护措施,谨慎操作!
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 0.6716x - 0.0005;x 为标准品(μg),y 为吸光值△A。
2、按样本质量计算:
硝态氮(NO3 -N)含量(μg/g 鲜重)=[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷(W×V1÷V)
=148.9×(△A+0.0005)÷W
3、按细胞数量计算:
硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/104 cell)=[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷(500×V1÷V)
=0.298×(△A+0.0005)
4、按照液体体积计算:
硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/mL) =[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷V1=148.9×(△A+0.0005)
V---加入提取液体积,1mL;
V1---样本的加样体积,10μL =0.01mL;
500---细胞数量,百万;
W---样本质量,g。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(500μg /mL):称量 3.61mg 的硝酸钾入 EP 管中,再加 1mL 蒸馏水
充分溶解(母液需在两天内用且-20℃保存)。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 40, 80, 120, 160, 200. μg/mL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样顺序操作,根据结果即可制作标准曲线。