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γ-谷氨酸激酶(γ-GK)试剂盒
价格：￥490
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/21 9:47:46更新时间：2024/10/29 14:43:28
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：159
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
γ-谷氨酸激酶（γ-GK）酶活测定试剂盒说明书
（货号：WS5011W 分光法 24 样）
一、产品简介：
γ-谷氨酸激酶(γ-GK，EC 2.7.2.11)是脯氨酸生物合成途径中的关键酶。催化由谷氨酸生成脯
氨酸途径的第yi步反应。
本试剂盒利用γ-GK 催化谷氨酸磷酸化，进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与 Fe3+
形成 Hydroxamate-Fe3+复合物 ，通过检测该复合物在 535 nm 波长处的 OD 值，进而得出γ-GK 酶
活力大小。该酶催化的反应方程式：ATP+L-glutamate=ADP+L-glutamate 5-phosphate。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 8mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下，使粉体落到底部，
再加入 10mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体 8mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用甩几下，使粉体落到底部，
再加入 1.8mL 蒸馏水溶解备用。
试剂五
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、离心机、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水。
四、γ-谷氨酸激酶（γ-GK）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清液待用。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 535nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温。
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂（μL）
测定管
对照管
样本
150
150
试剂一
150
120本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
150
150
试剂三
150
150
试剂四
30
混匀，37℃水浴 60min
试剂五
300
300
混匀，反应 2min 后，8000rpm，4℃离心 10min，取全部上清
液于 1mL 玻璃比色皿中，535nm 处分别读取吸光值 A，△A=A
测定管-A 对照管（每个测定管须设一个对应的对照管）。
【注】若ΔA 的值在零附近徘徊，则可加大样本量 V1（如增至 200μL，则试剂一相应减少），
则改变后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白在每小时内催化产生 1 nmol 谷氨酰羟肟酯所需的酶量定义为
一个酶活力单位。
γ-GK 活性(nmol/h/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=240×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位定义：每克组织在每小时内催化产生 1 nmol 谷氨酰羟肟酯所需的酶量定义为一个酶
活力单位。
γ-GK 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=240×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞在每小时内催化产生 1 nmol 谷氨酰羟肟酯所需的酶量定义为一
个酶活单位（U）。
γ-GK 活性(nmoL/min /104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.48×△A
4、液体中酶活力计算:
单位定义：每毫升液体在每小时内催化产生 1 nmol 谷氨酰羟肟酯所需的酶量定义为一
个酶活力单位。
γ-GK 活性(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=240×ΔA
V－－-提取液体积，1mL；
V1－－-加入反应体系中样本体积，0.15mL；
V2－－-反应体系总体积：9×10-4 L；
d－－-光径，1cm；
T－－-反应时间，60min=1h；
W－－-样本质量，g；
ε－－-摩尔消光系数，2.5×104 L/mol/cm；
Cpr－－－－样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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