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Caspase-3活性测定试剂盒微板法
价格：￥1600
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/21 10:47:34更新时间：2024/5/17 8:41:11
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：162
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
Caspase-3 活性测定试剂盒说明书
(货号：WS5121W 微板法 48 样)
一、产品简介：
Caspase-3 又称 CPP32、Yama 或 apopain，属于 CED-3 亚家族，是细胞凋亡过程中的一
个关键酶。
利用 Caspase-3 分解底物 Ac-DEVD-pNA 产生黄色的对硝基苯胺（pNA），后者在 405nm
有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率即可得出 Caspase-3 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存条件
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 0.5mL×1 支
-20℃保存
低温放置易冻住，放置室温使其
解冻成液体再用，用不完的试剂
分装后-20℃保存。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重做标曲则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、Caspase-3 活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌或培养细胞
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照数量（104）：提取液体积(mL)为 500-1000：1 的比例进行提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
② 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
40
试剂一
150
试剂二
10
混匀，于 405nm 处读取 A1 值，37℃反应 1h 后读取 A2 值。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】：1. 加完试剂二即启动反应，所以试剂二加完混匀后立即检测，若 A2 值大于 1.5，可减少样本加
样量 V1（如减至 10μL，则试剂一相应增加），或缩短反应时间 T（如由 1h 减至 30min），则改
变后的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
2. 若ΔA 小于 0.01，可延长反应时间 T（如由 1h 增至 2h 或更长），则改变后的 T 需代入公式重
新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0291x - 0.0004：x 为标准品（对硝基苯胺）(nmoL)，y 为ΔA。
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每小时催化底物产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
Caspase-3(nmoL/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0004)÷0.0291]÷(W×V1÷V)÷T=859.1×(ΔA+0.0004)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每小时催化底物产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
Caspase-3 (nmoL/h/mgprot)=[(ΔA+0.0004)÷0.0291]÷(V1×Cpr)÷T=859.1×(ΔA+0.0004)÷Cpr
4、按细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞每小时催化底物产生 1nmoL 对硝基苯胺定义为一个酶活单位（U）。
Caspase-3 (nmoL/h/104 cell)=[(ΔA+0.0004)÷0.0291]÷(500×V1÷V)÷T=1.72×(ΔA+0.0004)
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.04mL；
T－－-反应时间，1h；
W－－-样本质量，g；
500－－-细胞数量；
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：临用甩几下或离心，使粉体落入底部，加入 0.5mL
乙醇，涡旋震荡溶解后再加入 0.5mL 的蒸馏水混匀，得到 10μmol/mL 备用。
2 用蒸馏水把母液稀释成以下浓度：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5μmol/mL。也可根据实际来
调整浓度。
3 40μL 标准品+160μL 试剂一，混匀后于 405nm 处读取 A 值，依据结果即可制作标准
曲线。
ΔA=A2-A1。
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