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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

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多功能氧化酶(MFO)试剂盒

价格:¥560

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:48T 原产地:中国大陆 发布时间:2023/11/21 14:42:14更新时间:2024/11/20 9:43:06

产品摘要:我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测(为您节省时间)具体价格请lai电咨询

产品完善度: 访问次数:161

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
多功能氧化酶 (MFO)活性测定说明书
(货号:WS5190F 分光法 48 样)
一、产品简介:
多功能氧化酶 (MFO)是生物体内重要的一种解毒酶,可使昆虫适应植物的变化;减弱或
免受植物诱导抗性产生的有毒次生物质对昆虫的毒害。
多功能氧化酶(MFO)催化对硝基苯甲醚产生对硝基苯酚,该产物在 405nm 下有特征吸
收峰,通过检测该物质在 405nm 处的光吸收增加速率,进而得出 MFO 活性大小。
二、试剂盒的组成和配制:
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
四、多功能氧化酶 (MFO)活性检测:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min
取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温(25℃)。
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 60mL×1
4℃保存
试剂一
粉体 mg×2
4℃保存
每支用甩几下使试剂落入底部,分
别加入 1.4mL 乙醇,完全溶解后备
用,现配现用。
试剂二
液体 15mL×1
4℃保存
试剂三
粉体 mg×2
-20℃保存
临用甩几下或离心使试剂落到底
,每支加 2.7mL
蒸馏水溶解
,用不
完的试剂分装后
-20
保存,禁止反
复冻融,三天内用完。
标准品
粉体 mg×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
试剂名称(μL
测定管
样本
250本试剂盒仅供科研使用
2
【注】:若ΔA 小于 0.005,可增加样本量 V1(如增至 300μL,则试剂二相应减少),或增加取样质量
W(如增至 0.2g),则改变后的样本量 V1 和样本质量 W 需代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 3.8038x-0.0009PNP 摩尔浓度(μmoL/mL),y A
2、按样本鲜重计算:
酶活定义:每克组织每分钟产生 1nmoL 的对硝基苯酚(PNP)为 1 个酶活单位。
MFO(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(W×V1÷V)÷T
=8.8×(ΔA+0.0009)÷W
3、按样本蛋白浓度计算:
酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmoL 的对硝基苯酚(PNP)为一个酶活单位。
MFO(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(V1×Cpr)÷T
=8.8×(ΔA+0.0009)÷Cpr
4、按细胞数量计算:
酶活定义:每 104个细胞每分钟产生 1nmoL 的对硝基苯酚(PNP)为一个酶活单位。
MFO(nmoL/min/104cell)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(500×V1÷V)÷T
=0.018×(ΔA+0.0009)
5、按液体体积计算:
酶活定义:每毫升液体每分钟产生 1nmoL 的对硝基苯酚(PNP)为一个酶活单位。
MFO(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷V1÷T=8.8×(ΔA+0.0009)
V---加入提取液体积,1 mL
V1---加入样本体积,0.25mL
T---反应时间,30 min
W---样本质量,g
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(10μmoL/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:00.060.120.180.240.3 μmoL/mL
也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。
试剂一
50
试剂二
300
试剂三
100
混匀,立即于 405nm 处读取吸光值 A1
37℃孵育 30min 后读取 A2ΔA=A2-A1

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