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磷脂酶D(PLD)试剂盒微板法
价格：￥1870
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/21 14:54:11更新时间：2024/11/13 9:36:34
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：153
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
磷脂酶 D（Phospholipases D，PLD）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS5290W 微板法 48 样）
一、产品简介：
磷脂酶 D（EC 3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的
一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、
信号传导、生物膜形成的抗逆境胁迫等生理功能。
磷脂酶 D 催化水解底物 O-(4-硝基苯基)胆碱（NPPC），并在外加酸性磷酸酶的作用下产
生对硝基苯酚(PNP)，该产物在 405nm 处有大吸收峰。通过检测 PNP 在 405nm 下的增加
速率，即可得到 PLC 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
用摇匀再用。
试剂一
粉剂 mg×2 支
-20℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底
部，每支加 0.3mL 蒸馏水溶解备
用。用不完的试剂-20℃保存。
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用甩几下使粉剂落入底部，加
2.4mL 蒸馏水溶解且 5000rpm 离
心 5min，取上清液备用。用不完
的上清液-20℃保存。
试剂三
液体 14mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 2.5mL×1 支
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅或恒温培养箱、可调式移液器和蒸馏水。
四、磷脂酶 D（PLD）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的果实样本可取 0.2-0.3g），加入 1mL 提取液（用
摇匀再用），进行冰浴匀浆，13000rpm，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，
重复 30 次）；13000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长到 405nm，所有试剂解冻至室温（25℃）。
② 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
30
30
试剂一
10
试剂二
20
20本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
120
130
混匀，37℃孵育反应 30min。
试剂四
20
20
混匀，于 405nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定-A 对照(每
个样本需做一个自身对照)。
【注】：① 若△A 的值小于 0.01，可增加样本量 V1（如增至 60μL，则试剂三相应减少）或延长反应时
间 T（如增至 60min 或更长），则改变后的 V1 和 T 须代入公式重新计算。
② 若△A 的值超过 1，可减少样本量 V1（如减至 10μL，则试剂三相应增加）或缩短反应时间
T（如减至 10min）；或对终的待检液用蒸馏水稀释，则改变后的 V1 和 T 和稀释倍数 D
代入计算公式；
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0576x - 0.0012，x 是 PNP 摩尔质量(nmol)，y 是△A。
2、按照样本蛋白浓度计算：
酶活定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解 1nmol NPPC 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
PLD (nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0012)÷0.0576]÷(Cpr×V1)÷T×D=19.3×(ΔA+0.0012)÷Cpr×D
3、按照样本质量计算：
酶活定义：37℃中每克组织每分钟水解 1nmol NPPC 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
PLD (nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0012)÷0.0576]÷(W×V1÷V)÷T×D =19.3×(ΔA+0.0012)÷W×D
4、按细菌/细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟水解 1nmol NPPC 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
PLD (nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0012)÷0.0576]÷(500×V1÷V)÷T×D=0.04×(ΔA+0.0012)×D
5、按液体体积计算：
酶活定义：37℃中每毫升液体每分钟水解 1nmol NPPC 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
PLD (nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0012)÷0.0576]÷V1÷T×D=19.3×(ΔA+0.0012)×D
V－－-提取液体积，1 mL；
V1－－-加入反应体系中上清液体积（mL），0.03mL；
T－－-反应时间（min），30 min；
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
W －－-样品质量，g；
500－－-细胞数量；
Cpr－－-粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4ml 蒸馏水超声溶解。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 μmol/mL。也
可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 在 96 孔板中依次加入：30μL 标准品+150μL 试剂三+20μL 试剂四，混匀于 405nm 处
读值，根据结果即可制作标准曲线。
热门标签：磷脂酶D(PLD)试剂盒
