本试剂盒仅供科研使用
γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒说明书
(货号:WS6011F 分光法 48 样)
一、产品简介:
4-氨基丁酸(GABA)广泛分布在动植物体中。在动物体内 GABA 几乎只存在于神经
组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 G A B A,
且与植物的环境应激反应有关。
4-氨基丁酸(GABA)在碱性溶液中与次氯酸盐和苯酚反应生成蓝绿色物质,通过检
测该有色物质在 645nm 波长处的值,即可得出样本中 GABA 的含量。
二、试剂盒的组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液枪、水浴锅、离心机、
研钵、蒸馏水。
四、γ-氨基丁酸(GABA)含量测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
验样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织样本加入研钵中,加入 1mL 提取液,在冰上进行匀浆,12000rpm,
4℃或室温离心 10min,取上清液待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30 min,调节波长到 645 nm,蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温(25℃)。
③ 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
60
660
试剂二
200
试剂三
400
混匀,沸水浴(95-100℃)10min,冰浴至室温,呈现蓝绿色颜本试剂盒仅供科研使用
2
色,若浑浊需 12000rpm 离心 5min,取全部澄清上清液转移至
1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于 645nm 处读取各管的 A 值,
△A=A 测定-A 对照(每个样本需做一个自身对照)。
【注】1.若测定管的 A 值大于 1,则需将样本进行稀释(用蒸馏水稀释),稀释倍数 D
需代入计算公式重新计算。
2.若 A 测定-A 对照的差值在零附近徘徊,则可增加样本取样量(如增至 0.2g),
则取样质量 W 代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线:y = 0.0086x - 0.0033,x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA。
2、按样本质量计算:
GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(W×V1÷V)×D
=1162.8×(ΔA+0.0033) ÷W×D
3、按细胞数量计算:
GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(500×V1÷V)×D=2.33×(ΔA+0.0033)×D
4、液体中 GABA 含量计算:
GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷V1×D=1162.8×(ΔA+0.0033)×D
V---提取液体积,1mL;
V1---样本加入体积,0.1mL;
D---稀释倍数,未稀释即为 1;
W---样本取样质量;
500---细胞数量,万。
附:标准曲线制作过程:
1
标准品母液(2mg/mL):标准品临用加 1mL 蒸馏水溶解。
2
把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根据实际样本来调整
标准品浓度。
3
按照测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。