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胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD）活性试剂盒微板法
价格：￥1540
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/23 16:40:11更新时间：2024/8/2 14:41:27
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：151
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金标层析卡
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS6190W 微板法 96 样）
一、产品简介：
胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD，EC 1.1.1.8）的酶活水平直接决定了葡萄糖分解代谢
过程中向甘油合成方向的物质流分配量，也因此决定甘油的生成水平。
ctGPD 为 NAD 依赖型，催化磷酸二羟丙酮生成 3-磷酸甘油。通过 340nm 下测定 NADH
的下降量，进而得出 ctGPD 的酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×3 支
-20℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底
部，每支分别加
0.44mL
蒸馏水溶
解备用。用不完的试剂
-20℃
保存，
禁止反复冻融，三天内用完。
试剂二
液体 17mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底
部，加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
四、胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g）到研钵内，加入 1mL 提取液，在冰上进
行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取）
② 细菌/真菌样本：
先收集细菌/真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌/真菌（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：也可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取）
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
② 在 96 孔板中依次加入下列试剂：
试剂名称（μL）
测定管
样本
20
试剂一
10
试剂二
160
试剂三
10
混匀后立即在 340nm 处读取 A1 值，5min 后读取 A2。本试剂盒仅供科研使用
2
ΔA=A1-A2。
【注】：加完试剂三即启动反应，所以试剂三加完需立即检测，若 A1 超过 1.2 或ΔA 超过 0.35，则
减少样本上样量，试剂二相应增加保持原体系不变（如样本上样量减为 10μL 时，试剂二
增为 170μL），或减少反应时间 T（如减为 2min）。则改变后的 V1 和反应时间 T 需带入
计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
ctGPD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W× V1÷V)÷T=643.1×ΔA÷W
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
ctGPD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr)÷T =643.1×ΔA÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
ctGPD（nmol/min/104cell）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(500×V1÷V)÷T=1.29×ΔA
4、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
ctGPD（nmol/min/mL）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷V1÷T=643.1×ΔA
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.02mL；
V2－－-反应体系总体积，2×10-4 L；
d－－-光径，0.5cm；
ε－－-NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
W－－-样本质量，g；
T－－-反应时间，5min；
Cpr－－-蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
