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醇酰基转移酶（AAT）活性测定试剂盒
价格：￥970
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/24 11:14:14更新时间：2024/11/5 10:54:31
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：195
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
醇酰基转移酶（alcohol O-acetyltransferase, AAT）试剂盒说明书
（货号：WS6290F 分光法 24 样）
一、产品简介：
醇酰基转移酶（AAT，EC 2.3.1.84）是酯类化合物生物合成过程中的关键酶，研究表明
该酶活性与果实中酯类化合物的含量呈正相关。
醇酰基转移酶（AAT）催化乙酰 CoA 和醇类化合物生成酯类化合物和 CoA，生成的 CoA
具有还原性并可与 DTNB 作用生成黄色物质，该有色物质在 412nm 处有特征吸收峰，即
可得出 MS 酶活性大小。
反应式：acetyl-CoA+a primary alcohol=CoA+an acetyl ester
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 13mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用甩几下使粉剂落入底部，
再加入 1.2mL 蒸馏水溶解备用，
试剂三
液体 1mL×1 支
4℃保存
试剂四
液体 0.5mL×1 支
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水
四、醇酰基转移酶（AAT）活性测定：
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
200
试剂一
500
试剂二
40
试剂三
40
混匀，30℃条件下孵育 10min，立即于
412nm 处读取吸光值 A1，
试剂四
20本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，30℃条件下反应 15min，立即于
412nm 处读取吸光值 A2，ΔA=A2-A1。
【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间 T（如：30℃条件下孵育 30min 或更长），或增加样本
量 V1（如增至 400μL，则试剂一相应减少）。调整后的 T 或 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0188x + 0.0062，x 是标准品质量：μg，y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
AAT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0062)÷0.0188]÷(V1×Cpr)÷T÷Mr×103=23.1×(ΔA-0.0062)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
AAT (nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.0062)÷0.0188]÷(W×V1÷V)÷T÷Mr×103=23.1×(ΔA-0.0062)÷W
4 按细菌或细胞密度计算：
酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
AAT (nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.0062)÷0.0188]÷(500×V1÷V)÷T÷Mr×103=0.046×(ΔA-0.0062)
V1－－-加入样本体积，0.2mL； V－－-加入提取液体积，1mL； T－－-反应时间，15min；
W－－-样本质量，g；
CoA－－-Mr 分子量，767.5； 500－－-细胞或细菌总数，500 万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：用 1mL 蒸馏水溶解标准品（母液需在两天内用且-20℃
保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.04, 0.08, 0.12,0.16, 0.2 mg/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
3 依据以下步骤操作，50μL 标准品+130μL 试剂一+20μL 试剂三，根据结果即可制作
标准曲线。
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