本试剂盒仅供科研使用
溶菌酶(LYS/LZM)检测试剂盒说明书
(货号:WS7021W 微板法 96 样)
一、产品简介:
溶菌酶又叫胞壁质酶或 N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。能催化某些细菌细胞壁多糖的水解,
从而溶解这些细菌的细胞壁,起到杀死细菌的作用。
溶菌酶可使一定浓度的浑浊菌液降解,使浊度降低,透光度增加,可通过光度变化来测
定溶菌酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃干燥保存
临用甩几下使粉剂落入底
部,再加 22mL 试剂一涡旋
振荡,至全部溶解备用。
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
三、所需仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、水浴锅/恒温培养箱、离心机、蒸馏水。
四、溶菌酶(LYS/LZM)活性检测:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
验样本和试剂浪费!
1、 样本制备:
① 液体样本:澄清的液体直接检测,若浑浊则离心后取上清液检测。
② 组织样本:取约 0.1g 组织,加入 1mL 生理盐水,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离
心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min,设定温度 37℃,设定波长到 530nm。
② 标准品制备:临用甩几下使粉剂落入底部,再加 1mL 蒸馏水充分溶解,再用蒸馏水
稀释 100 倍(即 1:99),终浓度为 200U/mL,即 10μg/mL。
③ 所有试剂在 37℃条件下孵育 5min,在 96 孔板中依次加入:
试剂(μL)
测定管
标准管(仅做一次)
样本
20
标准品
20
试剂二
200
200
混匀,30s 于 530nm 读取吸光值 A1,2min30s 时再
读取 A2,△A=A1-A2。
【注】:1.加完试剂二反应即开始,若是批量检测,建议加完样本后,用排枪加试剂二,避本试剂盒仅供科研使用
2
免加样时间造成测定误差或者分批测定样本。
2.若 A2 的值小于 0.2,可对样本用蒸馏水稀释后再测定。稀释倍数 D 代入公式计算。
3.若测定管的△A 小于 0.005,可增加样本上清液体积 V2(如增至 50μL,则标准管多加
30μL 蒸馏水,保证两管总体积一致),则改变后的 V2 代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、按照体积计算:
溶菌酶含量(μg/mL)=C 标准×△A 测定管÷△A 标准管×D=10×△A 测定管÷△A 标准管×D
2、按样本鲜重计算:
溶菌酶含量(μg/g)=(C 标准×V1)×△A 测定管÷△A 标准管×D÷(W×V2÷V)
=10×△A 测定管÷△A 标准管÷W×D
3、按样本蛋白浓度计算:
溶菌酶含量(μg/mg prot)=(C 标准×V1)×△A 测定管÷△A 标准管×D÷(Cpr×V2÷V)
=10×△A 测定管÷△A 标准管÷Cpr×D
C 标准---标品浓度,200U/mL,即 10μg/mL;
V1---标准品加样体积,20μL=0.02mL;
V2---样本加样体积,20μL=0.02mL;
D---稀释倍数,未稀释即为 1;
V ---提取液,1mL;
W---取样质量,g;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。