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几丁质外切酶试剂盒
价格：￥690
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/29 10:36:00更新时间：2024/9/30 8:59:34
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：158
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细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
几丁质外切酶试剂盒说明书
（货号：WS7450F 分光法 24 样）
一、产品简介：
多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶，高等植物本身不存在作为真菌细胞壁
组分的几丁质，但当植物受到病原菌感染时，几丁质酶活性迅速提高。因此该酶与
植物对病原微生物的抗性有关，是重要的病程相关蛋白。
几丁质酶主要水解几丁质多聚体中β-1,4-糖苷键。依据水解位置的不同可分为几丁质
内切酶和几丁质外切酶，几丁质外切酶作用于几丁质后，生成 N-乙酰氨基葡萄糖单体，
进一步与铁氰hua钾反应，于 420nm 处检测，进而计算得到几丁质外切酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 7mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，
再加 2.5mL 盐酸充分混匀溶解
后，再加 2.8mL 蒸馏水混匀备用。
试剂三
液体 14mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉体 g×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，
再加 30mL 蒸馏水溶解备用。
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、水浴锅、低温离心机、盐酸。
四、几丁质外切酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，于 4℃，12000rpm
离心 10min，取上清置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照提取液体积(mL) ：组织质量（g）为 1：5~10 的比例进行提取
② 真菌样本：先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细胞加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 ，间隔 7 ，总时间 3min）；于 4℃，
12000rpm 离心 10min，取上清置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照提取液（mL）：细细胞数量（104）为 1：500~1000 的比例进行提取
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（µL）
测定管
对照管
样本
120
煮沸的样本
120
试剂一
80
80
试剂二
100
100
混匀，37℃（恒温培养箱）孵育 1.5h 后,4000rpm 离心 5min，取上清本试剂盒仅供科研使用
2
③ 在 EP 管中依次加入：
上清液
200
200
试剂三
270
270
混匀，4000rpm 离心 5min，取上清液待测
④ 在 EP 管中依次加入：
上清液
360
360
试剂四
480
480
混匀，95-100℃煮沸 8min，取全部液体至 1mL 比色皿中于 420nm 处
读取各管吸光值 A，ΔA＝A 对照-A 测定（每个样本做一个自身对照）。
【注】1. 煮沸的样本：于 95-100℃煮沸 10min，使样本里面的酶失去活性。
2. 若ΔA 较小，可以加大样本量（如增至 140µL，则试剂一相应减少），或增加样本取样量
（如 0.2g），则改变后的 V1 和样本 W 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、 标准曲线方程：y = 0.0248x + 0.0024，X 是标准品质量（μg），y 是ΔA。
2、按照样本重量计算：
定义：每克组织每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。
几丁质外切酶活性(μg/h/g 鲜重)=[(ΔA-0.0024)÷0.0248×1.96]÷(V1÷V×W)÷T
=439.1×(ΔA-0.0024)÷W
3、按照蛋白质浓度计算：
定义：每毫克蛋白每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。
几丁质外切酶活性(μg/h/mg prot)=[(ΔA-0.0024) ÷0.0248×1.96]÷(V1×Cpr)÷T
=439.1×(ΔA-0.0024)÷Cpr
4、按细胞数量计算：
定义：每 104个细胞每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。
几丁质外切酶活性(μg/h/104 cell)=[(ΔA-0.0024) ÷0.0248×1.96]÷(V1÷V×细胞数量)
=439.1×(ΔA-0.0024)÷细胞数量
V－－-加入提取液体积，1mL； V1－－-样本体积，0.12mL；
T－－-反应时间，1.5h；
1.96－－-体积系数；
W－－-样本质量，g；
标准品分子量－－-221.21；
Cpr－－-样本蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（1mg/mL）：标准品临用加 2mL 蒸馏水，即为 1mg/mL。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。
3 依据第④步骤的加样体系：360μL 标准品+480μL 试剂六，混匀，95-100℃煮沸 10min，取全部液
体至 1mL 比色皿中于 420nm 处读取各管吸光值 A，标准品的质量作为横坐标，0 mg/mL 对应的 A
值减去各浓度标准品对应的 A 之差作为纵坐标，即可得出标准曲线。
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