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二氢黄酮醇还原酶(DFR)试剂盒微板法
价格：￥1540
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/11/29 11:03:31更新时间：2024/9/29 8:35:25
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：161
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)试剂盒说明书
（WS8001W 微板法 48 样）
一、产品简介：
二氢黄酮醇还原酶（DFR，EC 1.1.1.219）是花色苷合成代谢中的一个关键酶，负责将 3
种二氢黄酮醇还原成无色花色素。在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽
及其营养品质方面起着重要作用。
二氢黄酮醇还原酶（DFR）作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化
合物，在 500nm 处有特征吸收峰进而得出 DFR 的酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体60mL×1瓶
4℃保存
试剂一
液体15mL×1瓶
4℃保存
试剂二
粉体×1 支
4℃保存
临用离心或甩几下使试剂落入底部，
再加 1.5mL 乙醇充分溶解，4℃保存。
试剂三
粉体×1 支
-20℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底部，分
别加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。用不完的
试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，
三天内用完。
试剂四
粉体×1 瓶
4℃保存
临用离心或甩几下使试剂落入底部，
再加 18mL 盐酸充分溶解，4℃保存。
标准品
粉体×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、乙酸乙酯、无水乙醇、研钵、冰。
四、二氢黄酮醇还原酶（DFR）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，温度设定 25℃，调节波长至 500nm。
② 试剂放在 40℃水浴 5min；
③ 按照下表在 EP 管中依次加入试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
40
40
试剂一
130
150
试剂二
20
试剂三
10
10
混匀，40℃反应 30min
乙酸乙酯
200
200本试剂盒仅供科研使用
2
37℃震荡 10min，取上层溶液，N2 吹干
无水乙醇
100
100
充分震荡混匀，待检液按照下表操作
④ 在 96 孔板中直接加入以下试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
待检液
50
50
试剂四
150
150
混匀，25℃静置 3min，立即于 500nm 处读取吸光
值 A（10min 内读值完成）。△A=A 测定管-A 对照
管（每个样本做一个自身对照）。
【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可延长反应时间 T（如：50min 或更长），
或加大样本量 V1（如增至 80μL，试剂一相应减少），重新
调整后的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为：y=0.0195x-0.0012，x 是标准品浓度（μg/mL），y 是△A。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每小时分解二氢槲皮素产生1μg儿茶素所需酶量为一酶活单位（U）。
DFR(μg/h/mg prot)＝[(ΔA+0.0012)÷0.0195×V 乙醇]÷(V1×Cpr) ÷T
=256.5×(ΔA+0.0012)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克样本每小时分解二氢槲皮素产生 1μg 儿茶素所需酶量为一酶活单位（U）。
DFR(μg/h/g 鲜重)＝[(ΔA+0.0012)÷0.0195×V 乙醇]÷(W×V1÷V) ÷T
=256.5×(ΔA+0.0012)÷W
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.04 mL；
T－－-反应时间，30 min=0.5h；
V 乙醇－－-0.1mL；
W－－-样本质量，g。
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（1mg/mL）：临用加 1mL 无水乙醇溶解（1mg/mL）。
2 用无水乙醇把标准品稀释成以下浓度：0，10，20，30，40，50. μg/mL。也可根据
实际来调整标准品浓度。
3 按照第④步骤测定管的加样表操作，依据结果即可制作标准曲线。
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