本试剂盒仅供科研使用
钙含量(邻甲酚酞络合铜比色法)检测试剂盒说明书
(货号:WS8121F 分光法 48 样)
一、产品简介:
钙(Calcium)是一种金属元素,常温下呈银白色晶体,动物的骨骼、蛤壳、蛋壳都含
有碳酸钙。检测生命体钙含量,主要通过检测钙离子浓度实现的。
本试剂盒利用溶液中钙离子在碱性条件下能与邻甲酚酞络合铜(OCPC)结合,生成紫
红色的络合物,加入镁离子螯合剂,去除镁离子背景干扰。通过检测生成有色络合物于
575nm 处的吸光值,即可计算出总钙含量。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 22mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 22mL×1 瓶
4℃保存
标准品
液体 1mL×1 支
4℃保存
2.5mmol/L 的钙标准品。
三、所需仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、离心机、蒸馏水(无钙离子)。
四、钙含量检测:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、 样本制备:
① 液体样品:澄清的液体样本如血清可直接检测。
② 组织样本:取约 0.1g 组织样本,加 1mL 生理盐水研磨,粗提液全部转移到 EP 管中,
12000rpm,常温离心 10min,上清液待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。
③ 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 生理盐水,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间
隔 10s,重复 30 次);12000rpm 离心 10min,取上清待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min,设定波长到 575nm,蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温,按照试剂一:试剂二为 1:1 配制反应 mix(4℃避光保存三天)。
③ 在 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
标准管
(仅测一次)
空白管
(仅测一次)
样本
10
标准品
10
蒸馏水
10本试剂盒仅供科研使用
2
【注】:1. 测定管的 A 值若超过 1.5,可把样本用蒸馏水稀释后测定,稀释倍数 D 代入计算公式。
2. 若 A 测定值接近 A 空白值,则可以增加样本加样体积 V1(如增至 50μL,则反应 mix 减
为 760μL;标准管仍为 10μL,蒸馏水 40μL,反应 mix 为 760μL;空白管为蒸馏水 50μL,
反应 mix 为 760μL),则改变后的 V1 需带入公式计算。
五、结果计算:
1.按液体体积计算:
钙含量(mmol/L)= (C 标准×V 标)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D
=2.5×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D
2.按样本质量计算:
钙含量(μmol/g)=(C 标准×V 标)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D
=2.5×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷W×D
3、按细胞数量计算:
钙含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V 标) ×103×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D
=5×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(A 标准-A 空白)×D
C 标准---钙标品浓度,2.5mmol/L=2.5μmol/mL;
V 标---标准品加入体积,0.005mL;
D---稀释倍数,未稀释即为 1;
V1---加入样本体积,0.01mL;
V---提取液体积,1mL;
W---取样质量,g;
500---细胞数量,万。
反应 mix
800
800
800
混匀,室温放置 2min,于波长 575nm 处读取各管吸光度 A。