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胰蛋白酶试剂盒-可见显色法，微板法
价格：￥1000
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/12/6 10:09:56更新时间：2024/11/13 9:36:34
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：170
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒说明书
(货号：WS9021W 微板法 96 样)
一、产品简介：
胰蛋白酶(EC 3.4.4.4) 是蛋白酶的一种，可以催化水解酰胺键。是一种重要的消化酶。
胰蛋白酶催化水解 N-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐(BAPNA)生成对硝基苯胺，后者
在 405nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率即可得出胰蛋白酶的活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存条件
备注
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 0.6mL×1 支
-20℃保存
若凝固则可于 37℃水浴至融化。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、胰蛋白酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本
和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 生理盐水，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，
置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加
入 1mL 生理盐水，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：若是澄清液体，直接检测，若液体样本浑浊，需 4℃×12000rpm，离心 10min，
取上清液检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
② 所有试剂解冻至 37℃或 37℃水浴 15-30min。
③ 反应 mix 制备：试剂二若凝固则可于 37℃水浴至融化，再按照试剂一：试剂二=0.97mL：
0.03mL 混匀成反应 mix，现配现用，用多少量配制多少反应 mix。
④ 在 96 孔板中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（μL）
测定管
样本
30
反应 mix
170
混匀， 立即于 405nm 处测定吸光值 A1，37℃
条件下反应 10min 后读取 A2，ΔA=A2-A1。
【注】若ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如延长至 20min 后读取 A2）或增加样本量 V1
（如增至 50μL，则反应 mix 相应减少），则改变后的 T 和样本量 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0259x - 0.001：x 为标准品(nmoL)，y 为ΔA。
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
胰蛋白酶(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(W×V1÷V)÷T=128.7×(ΔA+0.001)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
胰蛋白酶(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(V1×Cpr)÷T=128.7×(ΔA+0.001)÷Cpr
4、按细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位（U）。
胰蛋白酶(nmoL/min/104 cell)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(500×V1÷V)÷T=0.26×(ΔA+0.001)
5、按照液体体积计算：
单位定义：每毫升液体每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺定义为一个酶活单位（U）。
胰蛋白酶(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷V1÷T=128.7×(ΔA+0.001)
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.03 mL；
W－－-样本质量，g；
500－－细菌或细胞总数，500 万；
T－－-反应时间，10min；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：临用甩几下或离心，使粉体落入底部，加入 0.1mL 乙
醇，涡旋震荡溶解后再加入 0.9mL 的蒸馏水混匀，得到 10μmol/mL 备用。
2 用蒸馏水把母液稀释成以下浓度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/mL。也可根据实际来调整浓度。
3 30μL 标准品+170μL 试剂一，混匀后于 405nm 处读取 A 值，依据结果即可制作标准曲线。
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